微生物生理生化 和 与酵母细胞大小的测定.pptVIP

* 实验六 微生物生理生化实验 和酵母细胞数量与大小测定 1、实验目的 学习微生物生理生化实验方法 学习利用血球计数板和显微镜测定酵母细胞的数量 二、基本原理 P55 P75 p83 糖发酵试验：糖发酵管，6支/组 VP试验：葡萄糖蛋白胨水培养基，2支/组 吲哚试验：蛋白胨水培养基，2支/组 淀粉水解试验：淀粉培养基，1块/组 实验内容： 大肠杆菌(E. coli) 枯草芽孢杆菌(B. subtilis) 菌种： 1. 糖发酵试验：（含碳化合物的分解利用） （1）分别接种B.S和E.C于葡萄糖、蔗糖、乳糖培养基中。 （2）接种后恒温培养箱，培养2d。 （3）观察结果时，看各管颜色变化及管内有无气泡。产酸产气用“⊕”表示；只产酸不产气用“+” 表示；不产酸也不产气用“—”表示。 商品糖发酵管，含有指示剂溴甲酚紫。 （1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于蛋 白胨水培养基中。 （2）接种后恒温培养，培养2d。 （3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈明显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色 （注意：加入吲哚试剂后，不可再摇动，否则红色不明显）。以“+”、“—”表示有无红色的玫瑰吲哚。 3. 吲哚试验：（含氮化化合物的分解利用） 4. 淀粉水解试验（生物大分子的分解利用） （1）用油性笔在平板背面划成两等份。 （2）在两个区域分别点接B.S和E.C，倒置培养。 （3）观察结果时，打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。 透明圈的直径大小表征该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。 （4）记录结果，以 “+”、“－”表示有无透明圈 二 利用血球计数板和显微镜测定酵母细胞的数量和大小 每个大方格均被分成400个小方格；每个大方格的边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，在盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3（万分之一毫升）。 在每个计数室中取5个中方格进行计数 1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B =50000(or 32000)A×1 A: 5个中方格中细胞总数 B:稀释倍数 * * * * * （使呈明显的乙醚层）