检验实训课程标准.docVIP

任务一、血液细胞检查 ［实验目的与要求］ 1、掌握显微镜红细胞计数的原理和操作。 2、掌握红细胞形态检查的方法、正常红细胞的形态特点、异常红细胞形态学变化。 3、掌握显微镜白细胞计数的方法。 4、掌握外周血白细胞分类计数的方法、各种白细胞的正常形态和病理形态学改变。 ［实验方法］ 1、学生分组：6-7人/组； 2、教师通过ppt或操作示范等教学手段引导学生回顾血液细胞检查的相关基础知识； 3、教师运用各种器材和试剂进行讲解、操作示范； 4、学生分组进行操作练习； 5、教师逐一指导、检查学生受训情况； 6、教师总结学生受训情况。 ［实验条件要求］ 1、实验所需器材（设备）：显微镜、分光光度计。 2、所需耗材：采血用具一套，试管、试管架、吸管（2ml、5ml、0.5ml）、吸耳球、微量吸管、胶吸头、干脱脂棉、玻璃棒、改良Neubauer计数板、盖玻片、绸布、香柏油、拭镜纸、清洁液（乙醚与无水乙醇比例3：7） 3、试剂： （1）红细胞稀释液：枸橼酸纳1.0g，36%甲醛液1.0ml，氯化钠0.6g，加蒸馏水至100ml，混匀，过滤2次备用； （2）白细胞稀释液：2%冰乙醇溶液中加入10g/L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。 （3）瑞氏染液； （4）磷酸缓冲液（pH6.4～6.8） 4、标本：EDTA抗凝静脉血或末梢血。 ［实验内容］ 1、相关基础知识回顾：红细胞计数的检测原理，氰化高铁血红蛋白测定的原理，白细胞计数的原理，白细胞分类计数的原理。 2、操作要点讲解及示范： （1）红细胞计数：准确稀释红细胞，充分冲池，计数计算。 （2）红细胞形态检查：血片的制作和染色。 （3）白细胞计数：准确稀释血液，充分冲池，计数计算。 （4）白细胞分类计数、白细胞形态：血涂片制备，染色，镜检。 3、学生操作练习。 4、教师总结学生操作情况。 ［实验评分］ 血液细胞检查评分标准 项目 名称 操作要求 标准分 扣分 实得分 准备 白大衣穿戴整齐（1分），教材、实验报告、中性笔等用品准备齐全（1分），按学号正确取放显微镜，检查显微镜并填写显微镜使用登记本（2分），检查并放置好相关实验物品（1分） 5 操作 红细胞计数 准确加入红细胞稀释液（2分）；消毒皮肤，准确取血（2分）；擦去管尖外面多余的血液，插入稀释液底部，吸取其上清液清洗吸管；充入血细胞计数池内，注意充池的液量要适宜，使之恰好充满，无气泡及多余液体溢出（5分）。静置2～3min，使红细胞下沉（2分）。将血细胞计数板置于显微镜下，用低倍镜观察计数池内红细胞分布状况是否均匀（2分），如红细胞分布均匀，即可用高倍镜进行计数（5分）。计数完毕后,用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用（2分）。 20 红细胞形态检查 血涂片制备：取末梢血一滴，置于载玻片一端（1分），将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴即沿推片散开（2分），然后使推片与载玻片间以30～45°夹角（2分），平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀的薄层血膜（2分）。自然干燥（1分）。 染色：①用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出（1分）；②用瑞氏染液3～5滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1min（2分）；③滴加等量或稍多缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色5～10min（2分）；④平放玻片，用流水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检（2分）。 镜检：在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾部，在油镜下遵循数上不数下、数左不数右的原则，按一定的方向顺序观察红细胞形态。（5分） 20 白细胞计数 用刻度吸管准确吸取稀释液0.38ml，置于试管内（3分）。用一次性微量吸管采末梢血20ul（3分）。擦去管尖外部余血，将吸管插入稀释液底部，轻轻将血全部排出，然后吸取其上清液清洗吸管残余血液2～3次（6分）。混匀后静置5min，待红细胞完全溶解后，充入清洁而干燥的计数池与盖玻片的缝隙中（3分），静置2～3min，使白细胞下沉（3分）。计数:在低倍镜下，计数四角的四个大方格中的白细胞数（W）（9分）。计数完毕后,用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用（3分）。 30 白细胞分类计数、白细胞形态检查 血涂片制备:取末梢血一滴，置于载玻片一端（1分），将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴即沿推片散开（2分），然后使推片与载玻片间以30～45°夹角（2分），平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀的薄层血膜（2分）。自然干燥（1分）。 染色:①用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出（1分）；②用瑞氏染液3～5滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1min（2分）；③滴加等量或稍多缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色5～10min（2分）；④平放玻片，用流水从玻片的