第六篇 章 生物信息的传递（上）——转录2 分子生物学课件.pptVIP

● 基本概念 ● RNA聚合酶 ● RNA转录的基本过程 ● 原核生物与真核生物mRNA的特征比较 ● 内含子的剪切、编辑、再编码及化学修饰 Contents 5、内含子的剪切、编辑、再编码及化学修饰 RNA中的内含子； mRNA的剪接； RNA的编辑、再编码及化学修饰 真核生物基因是断裂基因（split gene） 真核生物基因的核苷酸顺序不全部反映到蛋白质一级结构上，有部分顺序不是蛋白质所必须或者说真核生物基因中编码序列被称为内含子序列分割成几段，这样的基因称为断裂基因 5.1 RNA中的内含子 ?-珠蛋白的mRNA与基因杂交 内含子（intron），也叫内元，相当于前体mRNA上切去部分的DNA 外显子（exon），也叫外元，相当于前体mRNA保留下来的DNA ?-珠蛋白的pre-mRNA与基因的杂交 鸡卵清蛋白mRNA与基因杂交图 5.2.1 核酶的发现与内含子的  剪接 p102 核酶（ribozyme）是指一类具有催化功能的RNA分子，通过催化靶位点RNA链中磷酸二酯键的断裂，特异性地剪切底物RNA分子。 “ Ribozyme” 由 T.Cech命名，是由核糖核酸（ribonucleic acid）和酶（enzyme） “重组”成的一个新词。 发现过程 1981年Cech等用四膜虫分离得到了35S的前体rRNA，它含有一个长413nt的内含子。此35S rRNA要加入一价或二价阳离子及GTP就可以在体外释放出413nt的线性的内含子，若继续保温，那么线性内含子又可形成环状的RNA。即具有自我剪接的能力。 35S的前体rRNA的剪接 四膜虫rRNA的自我剪接 鸟苷酸3’-OH作为亲核供体 15nt 4nt 连锁 核酶和传统酶的区别： (1)一般的酶是纯的蛋白质，而核酶是RNA或带有蛋白的RNA； (2)核酶既是催化剂又是底物。而酶仅催化反应。 核酶发现的意义：（1）突破了酶的概念. 是一种自体催化； （2）揭示了内含子自我剪接的奥秘；促进了RNA的研究。 （3）为生命的起源和分子进化提供了新的依据。 核酶的空间结构 核酶的催化功能与其空间结构有密切关系，目前已知有多种核酶大多有锤头型结构（hammerhead structure）。 例如： RNaseP的RNA亚基（M1 RNA）、锤头型、发夹型丁型肝炎δ病毒RNA、I类内含子和II类内含子等。 H H为G以外的其他碱基。 分 类 剪切型核酶：只剪不接，能够催化自身RNA或不同的RNA分子，切下特异的核苷酸序列。如M1 RNA 剪接型核酶：该酶具有序列特异的内切核酸酶、RNA连接酶等多种酶活性，即能切割RNA分子，也能将切割后的RNA连接起来。如I类和II类内含子。 生物体内内含子的主要类型： Ⅰ类内含子、Ⅱ类内含子（具有自我剪接功能） GU-AG类、AU-AC 类（不具备自我剪接功能） 5.2.2 剪接方式与内含子分类 (一) I类内含子的剪接 1. 其边界序列为5′U-G 3′； 2. 具有中部核心结构（Central core strucature）5’-P-Q-R-S-3’ 3. 内部引导顺序（internal guide seguence, IGS）: 内元中能够与两个拼接点边界序列配对的一段序列。 I类内含子的结构特点： 剪切机制：转酯反应(transesterification) （二） Ⅱ类内含子的剪接 Ⅱ类内含子的结构特点 边界序列为 5′↓GUGCG……PYnAU/G↓； 2. 有6个茎环结构； 有分支点顺序（branch-point sequence）：PYPUPYPYTA*PY 注:Py;任何一种嘧啶; Pu:任何一种嘌呤 (二)剪接机制 无需鸟苷酸的辅助，但需镁离子的存在。 分枝点A的2′-OH对5′端交界处的磷酸二酯键发动亲核进攻，产生了套索（lariat）结构（图13-31）； 切下的外显子1其3′-OH继续对内含子3′端的交界序列进行亲核进攻，同时释放出套索状的内含子。 （三）GU-AG类内含子——真核内mRNA的剪接 GU-AG类内含子 的结构特点： 1. 边界顺序:符合GU-AG法则(Breathnach-Chambon规则)。 2. 分枝点顺序：为Py80NPy87TPu75A*Py95其中A为百分之百的保守，且具有2′-OH。 3.内含子5′端有一保守序列可以和U1 snRNA的5′端的保守顺序互补 (二)剪接机制 剪接因子 snRNPs U1,U2,U5和 U4/U6。 GU AG