《动物模型谢强敏》课件.pptVIP

3．野百合碱皮下注射复制大鼠肺动脉高压模型 雄性Wistar大鼠，随机分为实验组和对照组。将野百合碱结晶（Singma公司产品）配成2％溶液，实验组以50mg/kg体重，一次性肩胛区皮下注射；对照组以生理盐水替代野百合碱作皮下注射。于注射后第12，16，24d分批处死动物。测定右心室和肺动脉压力，以及进行心肺病理检查。确定肺动脉高压的指标包括功能和形态学两方面，其中最直接的证据是肺动胎压力升高。因为常压缺氧肺动脉高压模型更类似于平原肺心病的发病情况，故目前多使用常压缺氧肺动脉高压模型，该模型可供从事这方面的发病机理、病理、实验性治疗和疗效原理等研究应用。 (四)支气管哮喘动物模型(animal model of bronchial asthma) 目前用作制备哮喘模型的动物很多，下面介绍几种常用的动物模型。 1. 卵白蛋白激发豚鼠哮喘动物模型 过敏原卵白蛋白注入豚鼠体内，其可溶性抗原成分刺激机体产生特异性免疫素(IgE抗体)，使机体处于致敏状态。当豚鼠三次接触到此抗原时，由IgE介导发生抗原抗体反应，使细胞脱颗粒，释放出活性化学物质如组胺、嗜酸性粒细胞趋化因子等，作用于支气管引起气道高反应导致哮喘。 健康雄性豚鼠体重300～500g，腹腔注射10％卵白蛋白生理盐水溶液10ml，使豚鼠处于致敏状态，2周后以10％卵白蛋白生理盐水溶液雾化吸人10min，诱发豚鼠哮喘发作。亦可选用200～300g的豚鼠．雌雄不限，于第1和第8天，将0.5％卵白蛋白(溶于生理盐水)10ml加至超声雾化吸人器，给豚鼠用简易面罩雾化吸入10min，第16～20d将致敏的豚鼠置于密闭的容器内．用l％卵白蛋白气雾激发，使动物暴露在卵白蛋白气雾中10～30min，直至出现哮喘样发作为止：啄鼠可出现气喘表现，咳嗽，烦躁，口唇和四肢紫绀，呼吸费力，挣扎，呼吸频率明显增快。用Ⅱ导生理记录仪可描记其呼吸曲线，出现呼吸频率加快和呼吸加深。病理检查可发现毛细血管扩张，嗜酸性粒细胞浸润，腺体分泌活动亢进。 卵白蛋白激发豚鼠哮喘发作是目前国内外常用的方法，其方法简单，可复制性强，且豚鼠是最好的显示气道高反应性的特征动物，其哮喘发作与人的表现相似。本模型主要用于哮喘发病机制的研究和治疗观察。 2．血小板活性因子(PAF)激发豚鼠哮喘模型 PAF是目前已知的惟一能引起气道高反应性炎症介质。目前大多数学者认为PAF引发哮喘发作的原因可能是FAF通过嗜酸性粒细胞的活化趋化、脱颗粒、释放嗜酸性粒细胞蛋白X、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)和碱性蛋白等细胞毒性物质引起气道上皮细胞损伤和脱落。另外，激活的嗜酸性粒细胞本身又合成和释放PAF，使这一过程加剧，最终引起气道高反应性。 选用300～500g成年雄性豚鼠，在激发实验当天，采用含0.25％小牛血清白蛋白的生理盐水，将PAF稀释成500ug/ml，按1500ug/kg体重的剂量雾化吸入，可引起豚鼠哮喘发作。 血小板活性因子激发豚鼠哮喘发作不需要致敏过程，直接利用其特性而引发气道的高反应性。本模型主要用于哮喘病因学和发病机制的研究。 3．狗过敏性哮喘模型 多数狗(约占70％～80％)有犬蛔虫感染，体内产生高滴度抗体IgE，而这些抗体与猪蛔虫抗原发生交叉反应，产生速发型变态反应。因而，模型制作时首先要挑选有犬蛔虫感染的狗，即皮肤过敏试验阳性的狗才能保证模型复制成功。 方法为： ① 猪蛔虫抗原制备：将收集到的猪蛔虫用生理盐水清洗数次后，将其制成匀浆，测量其容量，以其二倍量乙醚脱脂，离心1500r/min，15min。弃去上层脂质，下层即猪蛔虫抗原。 ② 用猪蛔虫抗原对狗做皮肤过敏试验：选用10～16kg重的狗，两性均可，先将0.5％伊文思蓝生理盐水溶液5ml/只给狗作静脉注射，然后立即在狗腹壁皮内注射0.5％猪蛔虫抗原0.1ml，30min后观察反应结果，如皮丘形成蓝斑，直径为1～2cm即皮肤过敏试验阳性。 ③ 用过敏试验阳性的狗做激发实验。方法：将狗以戊巴比妥钠30mg/kg体重静脉麻醉后，用Ⅱ导生理记录仪描记呼吸曲线，用1％猪蛔虫抗原超声雾化吸入，吸入后呼吸频率增加，可出现喘气、呼吸困难表现。 用狗制作此模型具有特异性，而且此模型较小，动物哮喘模型便于观察呼吸动力学变化，本模型用于哮喘病理生理和药物治疗研究，但应注意麻醉深度对哮喘激发的影响。 4．卵白蛋白激发大鼠哮喘动物模型 当过敏原卵白蛋白注入大鼠体内，其可溶性抗原成分刺激机体嗜酸性粒细胞产生特异性免疫素(IgE抗体)，附着于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，使大鼠处于致敏状态。当大鼠再次接触到此抗原时。每一个抗原分子和