SCID小鼠耳廓皮下滑膜移植模型的建立及其在英夫利昔疗效评估中的.docVIP

　　SCID小鼠耳廓皮下滑膜移植模型的建立及其在英夫利昔疗效评估中的 【摘要】 目的： 建立一种简便、可靠、易于给药及观察的小鼠荷人类风湿关节炎（RA）滑膜模型，为抗RA药物疗效及其机制的体内研究提供实验系统.方法： 无菌获取4例RA患者膝关节滑膜组织，修剪成3 mm3大小，移植入严重联合免疫缺陷小鼠（SCID）耳廓皮下，同时以2例OA滑膜作为对照.移植入4 Ab体英夫利昔治疗4 atoid arthritis，RA)滑膜炎症的重要工具，但均与RA患者体内的滑膜病变不完全相似.传统的严重联合免疫缺陷小鼠（SCID）荷人RA滑膜模型（SCIDHuRAg）多采用肾包囊移植，操作难度较大［1］，在实际应用中存在着一定的限制. 我们拟建立一种简便、可靠、易于给药及观察的（SCID）小鼠荷人RA滑膜（SCIDHuRAg）模型. 　　1材料和方法 　　1.1材料15只SCID小鼠由中国科学院上海斯莱克动物有限责任公司提供，鼠龄4～6 Ab，商品名类克，美国Centocor公司生产、西安杨森公司提供）；抗人IgG1（第四军医大学微生物教研室提供）.速眠新号注射液（解放军军需大学兽医研究所研制）. 　　1.2方法 　　1.2.1标本准备及处理无菌条件下获取RA及OA患者滑膜，保存于无菌4达氏修正依氏培养基（DMEM）中备用.超净台内修剪成3 mm3的组织块，移至预加入DMEM培养液的24孔板中，4保持至移植.自滑膜切除到移植的间隔时间为2～3 h. 　　1.2.2移植方法速眠新号注射液，150稀释，0.4 mL/只，腹腔麻醉， 在层流超净台中无菌操作.于双耳耳廓背侧基底做一个3 mm切口，用眼科镊插入切口在皮下钝性分离一4 mm×4 mm潜在腔隙，将修剪好的滑膜植入，不缝合.移植8 annWhitney U检验). Plt;0.05为差异有统计学意义. 　　2结果 　　2.1移植后小鼠一般情况全部小鼠无感染及意外死亡，体质量无明显变化（Pgt;0.05），活动状态良好.肉眼观察手术切口于移植后2 d基本愈合（无需缝合），未见移植物坏死表现. 　　2.2滑膜炎症评分 大体观察RA滑膜，红肿较OA滑膜明显. RA滑膜移植组较OA滑膜移植组的滑膜炎症评分高(Plt;0.05， 图1). 　　aPlt;0.05 vs OA滑膜移植组.图1RA与OA滑膜移植后滑膜炎症评分比较（略） 　　2.3RA滑膜移植前后移植物病理学改变RA滑膜移植前后病理学改变相似，均可见炎细胞浸润、滑膜增生及新生血管等表现(图2). 　　A：移植前； B：移植后. 　　图2RA滑膜移植前后病理评分比较HE ×40（略） 　　2.4英夫利昔治疗RASCIDHug的效果观察 　　2.4.1大体形态及评分与对照组相比，经英夫利昔治疗后移植物红肿明显减轻，滑膜炎症评分显著降低(Plt;0.05，图3，4）. 　　2.4.2病理评分英夫利昔治疗组与对照组进行病理分析，其滑膜增生、淋巴细胞浸润程度明显减轻(Plt;0.05，图5)， 新生血管减少，但无统计学差异. 　　A：对照抗体组； B：英夫利昔治疗组. 　　图3治疗组与对照组大体形态比较（略） 　　aPlt;0.01 vs 对照抗体组. 　　图4治疗组与对照组滑膜炎症评分比较（略） 　　aPlt;0.05 vs 对照抗体组. 　　图5英夫利昔治疗SCIDHuRAg后炎症病理改变（略） 　　3讨论 　　SCIDHuRAg的建立及应用使体内直接研究人RA滑膜炎症的病理机制及客观评价治疗措施的愿望成为现实［1］.本实验表明，SCID小鼠耳廓皮下滑膜移植的方法，创伤小，恢复快，较肾包囊移植在时间、可操作性上具有较大优势；耳廓皮下移植RA滑膜的病理特点与人体RA滑膜相似，且能够反映局部注射药物所引起的相应变化，是体内研究RA发病机制和开发评价新药的可靠平台. 　　此前，其他研究已经显示，人正常滑膜及RA的炎性滑膜能在SCID小鼠体内存活. Brinckerhoff等将分离培养的RA滑膜细胞注射到裸鼠皮下证实了人FLS和血管翳样组织能存活近30 d. 也有学者将RA滑膜直接移植到SCID小鼠的膝关节腔中，其中表达人CD68的细胞能维持8 wk，但所形成的血管翳组织及鼠软骨和骨的破坏主要系由鼠来源的细胞所介导. 最为典型的模型是肾包囊移植所建立的模型， Geiler等［4］将RA滑膜以及正常的人软骨共同移植到SCID小鼠体内观察到了软骨中血管翳样组织的形成. 但传统的肾包囊移植SCIDHuRAg存在操作难度大，且不能直接给药，无法肉眼观察等缺陷［1-2］. 　　我们通过改变移植部位，提高了建模的成功率，缩短了操作时间，减轻了对动物的创伤. 并参考胶原诱导性关节炎动物模型的关节炎评分标准制定了移植滑膜的炎症评分标准（Synovitis C