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湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定 动物医学进展.2011,32(9):46—50 ProgressinVeterinaryMedicine 湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定 艾地云,姚琪,罗玲,邵华斌,杨峻,杨前平,王红琳,温国元,罗青平,张蓉蓉 (1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室,湖北武汉430064 2.武汉理工大学资源与环境工程学院,湖北武汉430070) 摘要:对湖北省部分地区鸭疫里氏杆菌(RA)进行分离鉴定.应用胰蛋白大豆琼脂(TSA)培养基的 分离培养及染色试验,生化试验,PCR鉴定,得到86株RA.染色观察各地RA分离株的细茵形态一致,符 合RA特征;生化试验显示86株RA的生理生化特征相似,基本符合RA特征;应用建立的PCR技术均可 从这些茵株扩增到RA的特异性基因片段.通过与阳性血清所做的玻片凝集试验,证明分离出的RA茵株 全部属于血清1型.8个地区(市)的20个养鸭场皆分离出RA.经统计,脑组织中RA分出率(81/86)明显 高于心血(53/86)及肝组织(49/86);10日龄～21日龄鸭最易感,且鸭感染RA呈明显的年龄抵抗性;樱桃谷 鸭最易感.在RA阳性病料中同时分离到28株大肠埃希茵,显示其与鸭大肠埃希茵混合感染率高迭 32.56.人工感染鸭的致病性试验结果显示,RA的致病力较强,与大肠埃希茵混合感染的致病力更强. 结果表明鸭疫里氏杆茵病已成为湖北省养鸭业最常见的,危害最大的细茵性传染病之一. 关键词:鸭疫里氏杆菌;分离与鉴定;血清型;混合感染;致病性试验 中圈分类号:$858.32文献标识码:A文章编号:1007—5038(2011)09—0046—05 鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,是由鸭 疫里氏杆菌(Riemerellaanatipestifer,RA)引起 的鸭的一种细菌性传染病,主要侵害2周龄～8周 龄鸭,以纤维素性心包炎,肝周炎,气囊炎为主要的 病理特征,发病率5～9O,病死率可高达 9O[I～.Riemer于1904年最早报道了鹅感染RA 发病,郭玉璞等于1982年首次报道我国在北京发现 鸭感染RA发病,此后在全国各地相继有该病发生 的报道[2-7],已报道的RA有21个血清型,各地流行 的RA血清型各不相同,以1,2型RA最为多见,而 各血清型之间缺乏交叉免疫保护,给应用疫苗接种 防控该病增加了难度.近年来湖北省规模化养鸭业 发展迅猛,鸭传染性浆膜炎的病死率高达1O～ 30,给当地养鸭业造成了较大的经济损失.为了 摸清该病在湖北省的危害情况和发生规律,确定当 地RA流行株的血清型等,开展了本调查研究. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1病料来源2008~年3月～20O9年3月间, 在湖北省武汉,黄冈,黄石,荆门,荆州,咸宁,仙桃, 天门,潜江9个主要养鸭地区(市)21个规模化鸭 场,收集的具有典型传染性浆膜炎病变的死鸭或同 群病鸭196羽,其品种有樱桃谷肉鸭,樱桃谷种鸭, 汉南1号蛋鸭,地方麻鸭肉鸭,地方麻鸭蛋鸭,日龄 范围为10日龄～42日龄. 1.1.2培养基TrypticSoyAgar(TSA)为Difco 公司产品;麦康凯琼脂,小牛血清(FCS)为杭州四季 青生物工程材料有限公司产品.TSA琼脂(含50 g/LFCS),麦康凯琼脂培养基按各自使用说明书白 行制备. 1.1.3细菌微量生化反应管杭州微生物试剂有 限公司产品. 1.1.4分型血清1,2,5,7,9型RA标准阳性血 清由中国农业大学动物医学院苏敬良教授及扬州大 学兽医学院朱国祥教授惠赠. 1.1.5核酸提取试剂盒和PCR引物试剂盒为上 海华舜生物技术有限公司产品;PCR引物序列参照 文献Es-I,上游引物5一CAGCTTAACTG— TAGAACTGC-3,下游引物5一TCGAGATTTG— CATCACTTC3,由上海生工生物工程技术服务 有限公司合成. 1.1-6试验用动物1日龄健康樱桃谷鸭为武汉 收稿日期:2011-03-29 基金项目:湖北省科技攻关计划项目(2007AA201E02);湖北省科技计划研究与开发计划项目(2o09BBBoO3) 作者简介:艾地云(1962一),女,湖北随县人,副研究员,硕士,主要从事家禽传染病综合防控研究 艾地云等:湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定47 市黄陂某种鸭场孵化,饲养14d,期间不进行疫苗免 疫,无任何发病症状. 1.2方法 1.2.1病原茵的分离与鉴定 1.2.1.1细菌的分离培养无菌采集病,死鸭的 脑,心血,肝并划线接种到TSA(含50g/LFCS)培 养基和麦康凯培养基,将TSA培养基置于烛缸内, 然后与麦康凯培养基一起置37培养24h,观察细 菌的生长情况. 挑取在TSA培养基上呈圆形凸起,边缘整齐, 半透