基因工程理论基础与基本技术.pptxVIP

第二章 基因工程的理论基础与基本技术 ;第一节 基因工程的理论基础;（一）原核生物的基因结构特点;大肠杆菌乳糖操纵子 ;色氨酸操纵子 ;2.原核细胞mRNA的特征 ;3. 原核细胞基因的终止子 ;（二）真核生物基因的结构特点 ;内含子 是一个基因中非编码DNA片段，它分开相邻的外显子。 ;卫星DNA 真核生物基因组中高度重复的DNA,有一些20～30bp的极短序列，且以数千个拷贝的串连方式排列，这种序列称为卫星DNA。;3.真核生物mRNA的特征 ;(1)有助于mRNA越过核膜，进入胞质； (2)保护5′不被核酶降解； (3)翻译时供IFⅢ（起始因子）和核糖体识别，是翻译所必需的。;（2）3’末端Poly（A）尾巴;Poly（A）尾巴在基因工程操作中的作用： A、用Poly（T）作为合成cDNA第一链的引物。 B、用Poly（T）纯化柱从总RNA中分离mRNA;寡聚（dT）-纤维素柱层析法;Dynabeads　Oligo(dT)25是一种直径为2.8μm的均一的、超顺磁的微球体，其表面的5’连接键共价结合了由25个脱氧核糖核苷组成的长链。 ;二 从DNA到蛋白质 ;（二）基因表达;原核生物和真核生物比较;2.RNA聚合酶;3.表达过程;4.表达的调控;（2）原核生物的表达调控;可诱导调节是指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。;②弱化因子对基因活性的影响 ;③降解物对基因活性的调节 ;④细菌的应急反应 ;⑤环腺苷酸受体蛋白对转录的调控 ;总结;1．遗传密码与信息流 储存在DNA上的遗传信息通过mRNA传递给蛋白质，mRNA与蛋白质之间的联系是通过遗传密码的破译来实现的。mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为密码子，也叫三联子密码。蛋白质是通过遗传信息流由基因控制的。;2．结构基因和调节基因 结构基因(structural gene)是可以转录成为各种RNA(如rRNA、tRNA、snRNA)直接行使功能，或者转录成信使RNA(mRNA)然后翻译成多肽链，最终形成各种功能蛋白质和酶。 从广义上讲，任何一种能够调节或限制其他基因活性的基因都可叫做调节基因(regulatory gene)，一般情况下则是指基因产物参与调节别的基因活性的基因(如阻遏基因等)。首先转录成mRNA，然后由mRNA翻译成阻遏蛋白质或激活蛋白质，通常也称为转录因子或反式作用因子。它们通常结合到结构基因的非编码区的顺式元件上起调控作用。 ;3．管家基因和奢侈基因 具有相同遗传信息的个体细胞间其所利用的基因并不相同，有的基因活动是维持细胞基本代谢所必需的，而有的基因则在一些分化细胞或受到外界刺激的细胞中活动。前者称为管家基因(house-keeping gene)，如编码核糖体蛋白、线粒体蛋白、糖酵解酶等的基因；而后者被称为奢侈基因(1uxury gene)，;4．移动基因1967年在大肠埃细菌的乳糖操作子的研究中第一次发现了称为插入序列(insertion sequence，IS)的转座因子。直至1980年夏皮罗(Shapiro)等人证实了可移位的遗传基因存在，说明某些基因具有移动性。转座子也称易位子，是由两个重复顺序夹着一个或多个结构基因组成。有的转座子的重复序列就是IS。转座子也和IS一样，能从一个位点转座到另一个位点，或从一个复制子转座到另一个复制子。转座子属于可移动的遗传因子—移动基因。除了转座因子外，病毒和质粒都是染色体外的可以移动的遗传物质，都必须依赖宿主而复制。 ;5．重叠基因 核苷酸序列是彼此重叠的两个基因称为重叠基因(overlapping genes)或镶嵌基因(nested genes)。;;6．假基因 假基因是多基因家族中的成员，因其碱基顺序发生某些突变而失去功能，不能表达或表达异常，生成无生物活性的多肽。假基因DNA顺序可在相应基因名称之前加φ表示，如α珠蛋白基因家族中φξ1与功能性ξ2 基因同源， φξ1有3个碱基被取代，其中密码子6的GAG—TAG(谷氨酸→终止密码)发生无义突变。 ;例如，在珠蛋白、免疫球蛋白、组织相容性抗原(histocompatibi1ity antigen)以及肌动蛋白和微管蛋白等基因家族(gene family)中，都存在着这样的功能失活的假基因。 ;(1)重复的假基因许多假基因都是同“亲本基因”(Parental8ene)连锁的，而且同其编码区及侧翼序列的DNA具有很高的同源佳。可见产生此种类型的假基因拷贝的一种可能的机理是，由含有“亲本基因”的染色体区段串联重复形成，故称之为重复的假基因。珠蛋白基