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本章的主要内容;一、概念 电泳（Electrophoresis）：在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。 ;二、电泳分类 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。区带电泳的分类如下： ;1．按支持物物理性状不同，可分为： (1)滤纸及其他纤维素膜如乙酸纤维膜、玻璃纤维膜、聚胺纤维膜电泳。 (2)粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。 (3)凝胶电泳，如琼脂糖、琼脂、硅胶、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (4)丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。 ;2．按支持物的装置形式不同，可分为： (1)平板式电泳，支持物水平放置，是最常用的电泳方式。 (2)垂直板式电泳。 ;3．按pH的连续性不同，可分为： (1)连续pH电泳：电泳的全部过程中缓冲液pH保持不变。如纸电泳、乙酸纤维膜电泳。 (2)非(不)连续pH电泳：缓冲液与支持物之间有不同的pH，如聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳、等电聚焦电泳、等速电泳等，能使分离物质的区带更加清晰，并可作ng级微量物质的分离。 ;三、电泳的基本原理 电泳(Electrophoresis)是指带电荷的胶体粒子在电场作用下的定向移动现象。氨基酸、多肽、蛋白质和核酸等具有可解离基团，在溶液中能够形成带电荷的离子，不同物质由于带电性质不同，因而在一定电场强度下移动速度不同。不同的带电颗粒在同一电场中的泳动速度不同，常用迁移率或泳动速度表示。迁移率的定义为带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。 ; 式中：m为迁移率(厘米/伏特·秒)；v为颗粒的泳动速度(厘米/秒)；E为电场强度(伏特/米)；d为颗粒泳动的距离(厘米)；l为支持物的有效长度(厘米)，即载体与两极溶液交界面间的距离；V为实际电压(伏特)；t为通电时间(秒)。通过测量d、l、V，t便可计算出颗粒的迁移率。 ;;由上式可以看出泳动速度与电动电势(Z)、电场强度(E)及介质的介电常数(D)成正比，与溶液的粘度成（Cn）反比。式中C为一个常数，其数值为4～9π ，由颗粒大小所决定。 ;;影响迁移率的因素有如下几个方面：;2.电场 根据实验的需要，电泳可分为两种，一种是常压电泳，电压在500伏特以下，分离时间较长。另一种是高压电泳，电压为1000伏特以上，电泳时间很短，有时仅需数分钟。常压电泳多用于分离蛋白质等生物大分子物质；高压电泳则多用来分离氨基酸、多肽、核苷酸、糖类等小分子物质。 ;欧姆定律表示了电流(A)、电压(V)和电阻(Ω)之间的关系：A＝v/Ω (1)电流 迁移率与电流成正比。带电颗粒迁移的距离与通电时间也成正比。电泳时必须保持电流的恒定。 (2)电压 电压控制着电流，因此迁移率与加在支持介质两端的电位差(端电压)成正比。 (3)电阻 迁移率与电阻成反比 ;3.缓冲液;4.电渗 ;凝胶电泳的支持介质：; 聚丙烯酰胺是通过丙烯酰胺和N、N′-亚甲双丙烯酰胶在适当的游离基催化加速制作用下聚合而成的。催化加速剂一般是0.1－0.3％(W/V)的过硫酸铵与0.1－0.3％(W/V)的β-二甲氨基丙腈(DMAP)或N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TEMED)。凝胶的孔径由丙烯酰胺单体和交联剂N，N’-亚甲双丙烯酰胺的相对比例决定。;一般来说，不同分子量的蛋白质，在聚丙烯酰胺凝胶电泳中所选择的凝胶浓度不同，详见下表。;电泳的操作过程 ;几种染科 ;;;;四、电泳技术的应用;;;;;;蛋白质的鉴定; 1 2 3 4 5 6 7 ;;;Fig 2.3 Digestion with EcoR I and Xho I 1: pET-Lep M: DL-2000 marker;;Fig 2.5 SDSof leptin inclusion bodies, leptin after purification and refolding. M: Low molecular weight protein standard weight; 1: protein after refolding; 2: purified protein; 3: inclusion bodies; 4: bacterial proteins; 5: control;;;;;;