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2018-06-01 发布于上海
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nrf2are通路在pm2.5对人脐静脉血管内皮细胞损伤及rg1减轻该损伤中的作用-effects of nrf 2 are pathway on pm 2.5 injury to human umbilical vein endothelial cells and rg1 alleviation of the injury.docx

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nrf2are通路在pm2.5对人脐静脉血管内皮细胞损伤及rg1减轻该损伤中的作用-effects of nrf 2 are pathway on pm 2.5 injury to human umbilical vein endothelial cells and rg1 alleviation of the injury

摘要第一部分PM2.5三种提取成分对血管内皮细胞的毒性研究研究目的：研究大气细颗粒物PM2.5三种提取成分（有机和水溶、酸溶提取成分）的细胞毒性。研究方法：采用大气细颗粒物PM2.5,以人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）为靶细胞,研究PM2.5三种提取成分浓度0、50、100、200、400、800、1200μg/ml对细胞活力及氧化损伤毒性，采用MTT法染毒48小时后测定细胞的存活率，染毒6小时后荧光显微镜检测细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)水平的变化，测定丙二醛(MDA)水平。研究结果：大气细颗粒物PM2.5的三种提取成分染毒细胞后随着染毒剂量的增加细胞存活率呈下降趋势,ROS、丙二醛(MDA)则呈现增高趋势，染毒浓度为50、100、200、400、800、1200μg/ml有机成分细胞存活率分别为97.00±1.80、95.33±2.30、69.07±3.61、54.82±4.32、30.77±4.09、22.08±4.23(P0.05)，水溶成分细胞存活率分别为99.00±1.00、99.02±0.57(P0.05)、91.06±3.21、83.17±1.54、71.34±3.26、59.28±2.45(P0.05)，酸溶成分细胞存活率分别为99.06±0.82、98.97±2.18、96.85±3.23(P0.05)、90.28±2.15、85.32±1.73、79.28±2.98(P0.05)，染毒浓度为50、100、200、400、800μg/ml，有机成分细胞ROS分别为154±11、164±10(P0.05)、214±17、224±17、241±27(P0.05)，水溶成分细胞ROS分别为159±46、160±58(P0.05)、220±36、228±43(P0.05)，酸溶成分细胞ROS分别为164±9、168±7、170±17(P0.05)、196±18、204±11(P0.05)，有机成分细胞MDA分别为0.88±0.09(P0.05)、0.89±0.19、1.27±0.21、1.87±0.36、1.96±0.15(P0.05)，水溶成分细胞MDA分别为0.90±0.03、0.91±0.06、0.93±0.21(P0.05)、1.37±0.36、1.47±0.15(P0.05)，酸溶成分细胞MDA分别为0.91±0.24、0.93±0.20、0.96±0.34、1.01±0.15(P0.05)、1.50±0.15(P0.05)(P0.05)，与阴性对照组相比,P0.05具有统计学显著性，细胞的生存率有机提取成分染毒组低于水溶、酸溶成分染毒组，各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在三种染毒成分之间认为有差别,有机提取成分染毒组高于水溶、酸溶成分染毒组。研究结论：大气细颗粒物PM2.5三种提取成分均具有一定的细胞毒性,且有机成分大于其它两种成分，氧化应激是细胞损伤途径之一。关键词大气细颗粒物PM2.5人脐静脉血管内皮细胞活性氧丙二醛第二部分Nrf2/ARE通路在PM2.5对人脐静脉血管内皮细胞损伤及Rg1减轻该损伤中的作用研究目的：探究PM2.5诱导内皮细胞损伤以及Rg1对细胞的保护作用的可能机制研究方法：将人脐静脉血管内皮细胞（以下用英文简称HUVECs）以PM2.5及人参皂苷Rg1作用后，用CCK-8试验来测定HUVECs的增殖能力。HUVECs的氧化应激水平通过测定反应性氧化物（即ROS）和MDA来分析。对HO-1表达的影响用RT-PCR和印迹检测技术来测定。用激光共聚焦显微镜观察转录因子Nrf2的表达和核转位。研究结果：PM2.5浓度为200，400和800μg/ml，分别减少内皮细胞的活性30.7±2.8％，46.2±3.9％和70.2±2.8％，IC50值为526.9μg/ml。PM2.5与Rg1共同孵育48小时，Rg1以2.5，10和40μg/ml浓度依赖性拮抗PM2.5诱导的血管内皮细胞的活性下降。皂甙Rg1在2.5,10,40μg/ml分别使PM2.5的IC50上升至592.3，825.6和1232.1μg/ml。PM2.5剂量依赖性地刺激内皮细胞氧化应激产生，皂甙Rg1预处理显著增加HO-1、Nrf2mRNA和蛋白表达，降低ROS和MDA水平。100-800μg/mlPM2.5浓度依赖性增加细胞内的荧光。在空白组和PM2.5800μg/ml培养人脐静脉内皮细胞的绿色荧光强度分别为148.0±4.0和241.0±7.0（P0.01），皂甙Rg110μg/mL组和40μg/ml使最大的绿色荧光强度减少到216.0±2.0和206.0±3.0（P0.01）。PM2.5在100-800μg/ml浓度依赖性地增加MDA含量，最高为1.96±0.09nmol/mgp