orexina对培养大鼠星形胶质细胞迁移的影响及机制-effect of orexina on the migration of cultured rat astrocytes and its mechanism.docxVIP

缩略词表（Abbreviations）简称英文名称中文名称2-APB2-aminoethyldiphenylborinate二苯基硼酸1,2-双(2-氨基苯BAPTA-AM1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-n,n,n,n-netraaceticncidncetoxymethylnster氧基)乙烷-N,N,N`,N`-四乙酸四乙酸甲酯cAMPcyclic3’,5’-adenosinemonophosphate环磷酸腺苷中国仓鼠卵母细CHOchinesehamsterovary胞CNScentralnervoussystem中枢神经系统CPAcyclopiazonicacid环匹阿尼酸DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜乙二醇二乙醚二EGTAethyleneglycolbis(2-aminoethyl)tetraaceticacidERK1/2extracellularregulatedproteinkinasesGFAPglialfibrillaryacidicproteinMAPKmitogen-activatedproteinkinases胺四乙酸细胞外调节蛋白激酶胶质纤维酸性蛋白促分裂素原活化蛋白激酶MMP-9matrixmetallopeptidase9基质金属蛋白酶NGSnormalgoatserum正常羊血清OX1Rorexintype1receptorOrexins1型受体OX2Rorexintype2receptorOrexins2型受体PKCproteinkinasec蛋白激酶CSDSsodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠钙库耗竭诱发的SOCEstore-operatedcalciumentry外钙内流中文摘要第一部分Orexin-A对培养大鼠星形胶质细胞迁移的影响目的：Orexins即食欲素，是一对兴奋性神经肽激素的合称，于1998年在大鼠脑内发现。以往其研究主要集中在食欲调节、睡眠觉醒以及能量代谢等功能性方面，对星形胶质细胞的功能调节作用研究很少。本文主要讨论Orexin-A对培养大鼠星形胶质细胞迁移的影响。方法：用创伤愈合模型研究Orexin-A对培养大鼠原代星形胶质细胞迁移的作用，用免疫荧光方法鉴定星形胶质细胞上Orexin受体的表达和分布。结果：分别给予3nM，10nM，以及100nM的orexin-A，在作用0h、24h、48h通过共聚焦观察细胞迁移状态，发现orexin-A呈浓度时间依赖性的促进原代培养星形胶质细胞的迁移，其中orexin-A浓度为10nM，作用24h时，促进作用最为明显。进一步通过细胞免疫荧光方法检测了Orexin-A两种受体OX1R和OX2R在星形胶质细胞的表达。免疫荧光结果显示OX1R和OX2R在大鼠培养的星形胶质细胞大量表达。OX1R在胞浆和胞核均有表达，OX2R则只在胞浆表达，胞核分布很少。给予OX1R和OX2R抑制剂SB334867和TCSOX229预处理后，OX1R特异性拮抗剂SB334867能够显著抑制orexin-A诱导的星形胶质细胞迁移，OX2R受体抑制剂TCSOX229则不起作用。结论：orexin-A显著促进大鼠原代培养星形胶质细胞迁移，该作用是通过OX1R而非OX2R介导。关键词：星形胶质细胞；orexin-A；OX1R；OX2R；细胞迁移第二部分Orexin-A影响培养大鼠星形胶质细胞迁移的机制目的：ERK1/2通路是细胞迁移的主要信号通路之一，其上游主要受钙离子调节，而已有报道，Orexin-A能够诱导血管内皮细胞以及CHO细胞胞内钙的增加，对ERK1/2通路也有激活作用，但是在星形胶质细胞还没有相关报道。本文主要探讨Orexin-A促进星形胶质细胞迁移是否与胞内钙增加以及ERK1/2磷酸化等信号通路相关。方法：用创伤愈合模型诱导培养大鼠星形胶质细胞迁移，用钙离子荧光成像技术观察胞内钙的变化，用westernblotting实验观察各种通道抑制剂对ERK1/2磷酸化的影响。结果：Orexin-A（10nM，10min）处理星形胶质细胞，p-ERK的表达显著增加，ERK1/2通路抑制剂PD98059以及U0126能够显著抑制orexin-A对星形胶质细胞迁移的促进作用。胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理星形胶质细胞30min，orexin-A不再能诱导星形胶质细胞ERK1/2磷酸化。钙离子荧光成像实验发现，给予10nM的orexin-A能够诱导星形胶质细胞胞内钙浓度增加。给予EGTA无钙外液、内质网钙库耗竭剂CPA和非选择性SOCE（钙库耗竭诱导的外钙内流）抑制剂2-APB预孵育之后，显著抑制orexin-A诱导的星形胶质细胞胞内钙增加。但对于ERK1/2磷酸化的影响，仅仅只有EGTA和2-