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CpG DNA的免疫学活性及在鱼类疾病防治中的应用 ●小综述 文章编号:1000-1336(2005)04-0309—03 《生命的化学)2005年25卷4期 CHEMISTRYOFLIFE2005,25(4) CpGDNA的免疫学活性及在鱼类疾病防治中的应用 郑风荣,,刘洪展z孙修勤 (中国海洋大学生命科学与技术学部,青岛266003;山东大学威海分校海洋学院,威海264209;国家海洋局第一海 洋研究所,青岛266061) 摘要:研究发现,细菌中的CpGDNA和人工合成的CpGODN可激活T细胞,B细胞,NK细胞等免疫活性细 胞,产生多种细胞因子,增强机体的非特异性和特异性免疫,并诱导Thl型介导的免疫反应,是高效,安全的 新型免疫佐剂.该文简要介绍CpGDNA的结构特点,免疫学性质以及在鱼类疾病防治中的应用. 关键词:佐剂:CpG:鱼类 中图分类号:Q392 一 直以来,DNA都被认为是一种重要的遗传 物质,但是近年来的研究发现,细菌,病毒,酵 母,昆虫,线虫,软体动物等的DNA和寡脱氧核 苷酸(ODN)具有免疫激活特性,能引起机体的免 疫应答,而这些DNA和ODN大多含有以非甲基 化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)为模体的特定结 构,因而被称为CpG模体(motif).CpG模体可激 活T细胞,B细胞,NK细胞等免疫活性细胞,产 生多种细胞因子,增强机体的特异性和非特异性 免疫.短短几年问,这种特定DNA对免疫系统的 免疫刺激引起了生命科学,医学界和药学界的广 泛关注.本文着重介绍CpGDNA的结构特点, 免疫学性质及在鱼类疾病防治中的应用. 1.CpGDNA的发现 1984年,日本科学家Tokunaga等【l发现牛分 支结核杆菌(Mycobacteriumbouis,BCG)提取物 MY一1,可以激活小鼠的NK细胞,诱导IFN和抗 肿瘤活性的产生.进一步的研究证明,MY一1的 抗肿瘤活性是由BCG的DNA引起的,而且MY一 1的毒性很低I2l.大量研究发现具有免疫刺激活性 的ODN均含有非甲基化CpG二核苷酸核心及其 特定的旁侧序列(flankingsequence),Sato等[31则 称其为免疫刺激序列(immunostimulatoryse. quence,ISS),并提出非甲基化的CpG是DNA或 ODN刺激机体产生免疫应答所必需的结构基础. 收稿日期:2005—06—20 国家”863”计划资助项目(No.2003AA622030) 作者简介:郑风荣(1975一),女,博士生,Email:lydia 7400@163.con;孙修勤(1944一),女,博士,研究员,联系作 者,Email:xiuqin—SUII~io.org.en 近年来,人们对CpGODN的结构特征,作用机 制,功能,特性等开始进行大量的研究. 2.CpGDNA的结构特性 Sato等口1认为,CpG模体含有自身回文对称 是诱生NK细胞活性和IFN一?的基础,也有人认 为CpGDNA有无免疫活性与回文对称结构没有 严格的对应关系,回文结构可能对免疫活性的强 弱有影响,但不能决定其活性的有无.Kandimalla 等【的研究表明,CpG二级结构的5末端比3 末端更能影响其免疫活性,5末端起接受识别作 用,两个CpG如果通过5一5连接,CpGODN的 免疫活性则会消失,所以开放的5末端是CpG ODN免疫活性的基础. 有研究表明,ODN中CpG模体的数量与免疫 刺激作用的强弱有一定的关系,并有种属特异 性,不同物种的最合适ISS有所不同,其中包含 的CpG模体重复次数也不同.如5一GACGTr一3 具有极强的刺激小鼠NK细胞和B细胞的能力. 但对人的NK细胞几乎没有影响;5一GTCGrIT一3 对人具有最佳的刺激活性,但对小鼠免疫细胞的 刺激能力显着低于5一GACGTY一3;含有5一 ATCGAT一3模体的ODN对猪外周血单个核细胞 具有最佳的刺激活性. CpG模体本身核酸骨架的硫代磷酸化修饰不 仅能够抵抗核酸酶的降解,延长其在细胞和体内 的存在时问,还可以提高细胞对ODN的摄取,提 高其刺激活性.另外,将CpGODN悬浮于矿物 油或包埋人脂质体中,可以防止核酸酶的降解, 增强其活性.DDpke等[61认为,CpGODN中多聚 (G)序列与硫代磷酸酯骨架的共存,有可能改变 ? 310? 《生命的化学}2oo5年25卷4期 CHEMISTRYOFLIFE2005,25(4) CpGODN在细胞内的分布而影响其活性.但是 Krieg等[71研究发现,某些ODN的不同骨架形式 对于不同的免疫细胞,其免疫刺激作用的强弱也 有不同.某些磷酸二酯键骨架的CpG本身对NK 细胞具有极强的活性,经过替换后却失去了活性. 3.CpGDNA的免疫学作用 3.1CpG