遗传学课件第8篇 章 肿瘤-4h.ppt

* 癌基因在细胞内的分布 肿瘤的分子基础－癌基因 * 3.癌基因的激活机制 细胞中原癌基因可以通过一些机制被激活,导致基因表达或过表达,从而使细胞癌变。 一般分为4类: 点突变 基因扩增 染色体易位或重排 启动子插入激活 肿瘤的分子基础－癌基因 * 3.1 点突变（point mutation） 单个碱基突变而改变了编码蛋白质的功能使癌基因激活，如K-ras N-ras，H-ras第12、13、61密码子突变。 肿瘤的分子基础－癌基因 * 3.2 基因扩增（gene amplification） 细胞学水平： 均质染色区（HSR）—染色体某个节段、相对解 旋、浅染区，染色体增长。 双微体（DM）— 扩增的DNA脱离染色体，分散为 成双的染色质小体。 分子水平： 基因拷贝倍增------如神经母细胞瘤 N-myc。 肿瘤的分子基础－癌基因 * 均质染色区（HSR）和双微体（DM） 肿瘤的分子基础－癌基因 * 3.3 染色体易位或基因重排 染色体断裂与重排导致细胞癌基因在染色体上的位置发生改变，与其他高表达基因形成融合基因，或易位到启动子或增强子附近而被激活 。 CML: t（9;22） 9q+ 和 22q-（ Ph1） BL: t（8;14） 8q- 和 14q+ 肿瘤的分子基础－癌基因 * 3.4 启动子插入（promoter insertion） 接种 4－12个月 ALV 鸡（1日龄） B.C淋巴瘤 （ALV：鸟类白细胞组织增生病毒，含有LTR，具有启动子活性，一旦整合到细胞癌基因c-MYC旁可使之激活） 肿瘤的分子基础－癌基因 * 二、肿瘤抑制基因（Tumor Suppressor Gene, TSG） 概念：正常细胞中存在的一类调节细胞生长增殖分化，具有抑制肿瘤细胞增殖作用的基因。 与原癌基因区别： 原癌基因是显性基因，一个等位基因突变即可显示致癌效应； 肿瘤抑制基因是隐性基因。一个肿瘤抑制等位基因发生突变，不会发生致癌效应。即只有当其一对基因拷贝失活、丧失功能后，形成隐性状态才失去抑制肿瘤发生的作用，故亦称隐性癌基因。 * TSG发现及研究的途径 －－发现TSG的方法和证据 细胞融合实验 克隆第一个TSG（RB1） 杂合性丢失(Loss of heterozygosity, LOH) 罕见家族性癌综合征研究 肿瘤的分子基础－TSG * 1.细胞融合实验 Harris（1971） 应用微细胞技术 将含有一条正常染色体的微细胞与肿瘤细胞融合，可抑制肿瘤，这为寻找TSG提供线索。 肿瘤的分子基础－TSG * 2.克隆第一个TSG - RB1 细胞遗传学证据： 1976年对多个RB患者染色体缺失鉴定，最后确定于13q14。 肿瘤的分子基础－TSG * 分子遗传学证据： 1983年： Cavanee用13q12-q14片段为探针，经杂交实验确证存 在此区域存在一个4.7kb的基因。 1986年： Friend首先分离一cDNA克隆，Lee WH又克隆了三 个重叠的cDNA克隆，进行RB基因测序。 1988年： Su Huang HJ用反转录酶为载体将RB导入RB细胞 系，基因表达并抑制肿瘤特征，证实RB1是一个TSG。 RB1： 200kb，27exons，mRNA 4.7kb，编码105kD蛋白，928 个氨基酸，是一与DNA结合的磷酸化蛋白质，具有一个 GGAAGTA元件，受P53调节。 肿瘤的分子基础－TSG * R B基因为 第一个被克隆的 T S G 肿瘤的分子基础－TSG * 3.杂合性丢失 杂合性丢失（Loss of heterozygosity，LOH）：肿瘤细胞染色体特定区域的杂合性等位基因中一个丢失的现象； 在肿瘤抑癌基因中普遍存在； 可以用能区分两等位基因的多态标记来检测杂合性丢失。DNA多态标记的杂合性丢失可有助于确定与其紧密连锁的抑癌基因的存在并精确定位。 肿瘤的分子基础－TSG * 肿瘤的分子基础－TSG * 4.罕见家族性癌综合征研究 家族性癌（familial carcinoma)：一个家族中多个成员患同一类型的肿瘤。 例如，（1）RB （2）Li-Frau