重组蛋白包涵体表达的复性 和 与纯化.pptVIP

重组蛋白药物包涵体表达、复性和分离纯化;; 包含体的形成和性质;包涵体形成的几种可能性;包涵体形成：Advantages;分 类;包涵体的洗涤 细胞破碎后，包含体呈颗粒状，致密。 洗涤的重要性：收集的沉淀中，除包涵体外，还包括许多杂质，如膜蛋白、肽聚糖、脂多糖等，复性时会与目标蛋白一起复性形成杂交分子而聚集，给后步纯化带来困难。 洗涤剂：温和的表面活性剂（Triton X-100）、低浓度的弱变性剂（如尿素）或脱氧胆酸等。能溶解除去部分膜蛋白和脂质类杂质。 洗涤剂浓度以溶解杂质，不溶解包涵体中表达产物为原则。;包涵体的溶解;蛋白质的复性：包含体蛋白质溶解于变性剂溶液中，呈变性状态，所有的氢键、疏水键全部被破坏，疏水侧链完全暴露，但一级结构和共价键不被破坏，当除去变性剂后，一部分蛋白质可以自动折叠成具有活性的正确构型，这一折叠过程称???蛋白质复性。;复性常用方法;复性;色谱过程及其分类;层析填料的选择;凝胶过滤色谱; 生物体内许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性(亲和力)。 把与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，则当含有目的产物的混合物(流动相)流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。;亲和色谱(Affinity Chromatography，AFC); 离子交换色谱是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，由于混合物中不同溶质对交换剂具有不同的结合力而将其分离。 该法适合于离子和在溶剂中发生电离物质的分离。 离子交换色谱广泛用于生物大分子分离纯化，特别是在蛋白质、多肽、核酸等生物物质的分离纯化。 ;离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography，IEC) ;疏水色谱（HIC）;疏水色谱（HIC）;推荐书籍、资料;Thank You !