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冷沉淀的临床应用 2O世纪60年代冷沉淀被发现，因其含有丰富的凝血因 子Ⅷ(FⅧ)而用于血友病甲(HA)的治疗，后来相继用于纤 维蛋白原(Fg)缺乏、凝血因子XIII(FXIH)缺乏和血管性血 友病(vWD)的治疗。目前，仍有许多国家用未经病毒灭活 的冷沉淀治疗不同原因出血倾向的疾病，但由于其纯度不 高，且在体内的生物半衰期仅10 h，在发达国家，除非无可选 择或紧急情况下，并不考虑应用冷沉淀治疗HA、vWD和FX Ⅲ缺乏等疾病。澳大利亚和新西兰已经放弃了冷沉淀用于 FⅧ缺乏患者的治疗。国外正在淘汰该制剂，但在我国还在 广泛应用。 1 冷沉淀的组成及作用机制 冷沉淀主要含有5种成分：FⅧ 、Fg、vwF、纤维结合蛋白 (纤维粘连蛋白，Fn)和FXIII。FVIH又称抗血友病球蛋白，是 一个由FN促凝血活性(Fvm：e)、Fvm促凝血抗原(FWmcAg)、 FⅧ有关抗原(FⅧRAg)和FⅧ有关的瑞斯托雷素辅因子 (vWF：Rco)等组成的大分子复合物，可加速FX活化，促进 血小板聚集，有助于血小板因子Ⅲ的释放和形成内源性凝血 活酶，其含量增加可促进内源凝血系统激活加快。FVIn的体 内生物半衰期变化较大，一般为8—12 h。感染和发热可使 FV]I体内代谢加快，消耗增加，半衰期缩短，导致凝血活性降 低。Fn是一种粘性糖蛋白，具有促进纤维蛋白交联、细胞粘 着、上皮细胞移行、修复和分化的作用，同时具有抑菌、抗感 染和免疫调控作用。Fg是凝血公共途径上的效应分子，其 含量增多可使内源性和外源性凝血途径加快。Fg还是血小 板间的桥梁，含量增高可使血小板聚集功能增强。从理论上 讲，冷沉淀与FFP相比，Fg的活性增加了15_2O倍，FⅧ 的 活性增加了lO倍，FXIl的活性增加了4．5倍 J。 2 冷沉淀的制备 冷沉淀的传统手工制备方法为：全血采集后6 h内分离 制备为新鲜冰冻血浆(FFP)，将FFP放入4E水浴中融化 (或在4 冰箱中放置14—18 h)，融化过程中轻轻摇动血 浆，约剩60 ml冰渣时取出，4cc，2 000 g离心15 min，无菌条 件下移除血浆，留下未溶解的约20 rnl白色胶状物，立即冻 存于一30℃冰箱内即为冷沉淀。国外把450 ml全血分离的 血浆制成的冷沉淀作为1U，国内把400 ml全血分离的血浆 制成的冷沉淀为1U，也有少数血站把200 ml全血分离血浆 制备成的冷沉淀为1U。冷沉淀的有效期为1年，质量标准 本栏主编 田兆嵩 为200 ml FFP制备的冷沉淀应含 ≥150 mg，FⅧ ≥80 IU。 Rock等” 报道一种新型、快速制备冷沉淀的自动化设备，用 时仅55 min，可以从200 ml FFP制备出含有184 mg Fg和 158 IU FⅧ的冷沉淀，明显高于传统的手工制备方法。也有 报道用传统方法制备时，在血浆中加入枸橼酸盐能够提高冷 沉淀的质量，FN的含量提高到了34％_215％ ， 的水平范 围提高到了55．5％一121．4％L2 J。研究发现血型不同，冷沉 淀中凝血因子的含量也不同，O型Rh(+)明显低于A型Rh (+)和B型Rh(+)；而且储藏时间不同，FⅧ含量也不同， 储藏6个月前的FⅧ 含量明显高于储藏6—12个月的。冷 沉淀融化后储藏2、4、6 h后，FⅧ活性分别下降10．35％ ， 21．49％ 和29．41％ 3 冷沉淀的病毒灭活 冷沉淀的病毒灭活有机溶剂法(SD)，方法为在冷沉淀 中加入2％的磷酸三丁酯(TnBP)在37℃4 h，或者1％ TnBP 和1％ Triton X-45在37℃4 h。经此法灭活后，FⅧ 、vWF： Rco(瑞斯托霉素辅因子)和有凝血活性的Fg的平均回收率 均大于93％ ，TnBP和Triton X-45的残留量分别小于10 ppm 和50 ppm_4 J。Burnouf等 用sD法在小范围内进行病毒灭 活，结果血浆蛋白(如FⅧ、Fg或者纤维蛋白抑制子)的回收 率很好，对HIV、BVDV(牛腹泻病毒)和PRV(伪狂犬病病 毒)的灭活指数分别达到4．17、4．73和4．72。研究发现用 sD法对密封袋内小量汇集的冷沉淀进行病毒灭活不但能够 提高病毒灭活的性能，而且可以提高FV]I、vWF和 的活 性 J。1996年1月，英国限制应用亚甲兰光照法(MB)对冷 沉淀进行病毒灭活，到2005年才解除限制。经MB处理后 的冷沉淀与原血浆相比较，FⅧ活性下降了30％ ，vwF活性 下降了11％ 。另有报道经MB处理后的冷沉淀，Fg浓度比 血浆下降了40％I7]。从O型和A型人血浆中制备的冷沉淀 经MB处理后，FⅧ活性下降了27％__4O％ 。但临床用量显 著增加了，可能是凝血因子的活性减低而使用量增加。 4 冷沉淀的临床应用 4．1 用于治疗HA HA又称为