rsafp2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究-construction of plant expression vector of rs afp 2 gene and its transformation into capsicum annuum l..docxVIP

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2018-06-03 发布于上海
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rsafp2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究-construction of plant expression vector of rs afp 2 gene and its transformation into capsicum annuum l..docx

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rsafp2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究-construction of plant expression vector of rs afp 2 gene and its transformation into capsicum annuum l.

中文摘要目前栽培的辣椒品种大多极易遭受真菌、细菌、病毒和线虫等侵染而引起严重病害，给辣椒生产造成重大的经济损失。利用日益成熟的基因工程技术来提高辣椒的抗病性，培育高抗性辣椒新品种，已成为国内外辣椒抗病研究的新策略。来源于马铃薯编码谷脱甘肤转移酶(GSTl)的病原菌防卫基因基因prpl才启动子能受马铃薯晚疫病等多中病原菌侵染诱导。本研究克隆了prp1-1启动子片段(273bp)，构建了萝卡抗真菌蛋白(Rs-AFP2)基因诱导型植物表达载体pBPR-2，另外还构建了萝卡抗真菌蛋白(Rs-AFP2)基因组成型植物表达载体pBCR斗，并将它们导入保加利亚尖椒。所获得的主要结果如下=(1)利用PCR方法直接从马铃薯叶片总DNA中克隆了受真菌诱导的prp1-1启动子片段，构建了萝卡抗真菌蛋白基因诱导型植物表达载体pBPR-2，使prp]-]启动子片段控制Rs-AFP2基因受真菌诱导表达:同时构建了Rs-AFP2基因组成型植物表达载体pBCR-2o(2)建立了保加利亚尖椒的再生体系，优化了辣椒子叶外植体不定芽诱导分化和不定芽的伸长培养基配方白最佳不定芽诱导分化培养基为:MS+6-BA5.0mg/L+IAAO.5mg/L+AgN035mg/L+PTO.3mg/L;最佳不定芽伸长培养基为:MS+GA31mg/L+6-BA1.5mg/L+PTO.3mg/L;最佳生根培养基为:MS+lAAmg/L+NAA0.5mg/L。(3)优化了重组农杆菌GV1301转化辣椒的方法。外植体预培养2d、农杆菌侵染7min、共培养3d为比较理想的转化条件，有利于提高转化率;另外，AS能在一定程度上提高转转化率，100μmol/L就可以达到较好的效果。(4)将RsAFP2基因导入保加利亚尖椒。转化后再生的植株经PCR和PCR-Southern杂交检测，证实Rs-AFP2基因已经整合到保加利亚尖椒基因组中，分别得到了Rs-AFP2基因诱导型表达(pBPR-2)和组成型表达(pBCR-2)的保加利亚尖椒转化植株。关键词辣椒:抗病:诱导型表达载体;构建:转化111AbstractTheseriousplantdiseaseproblemofpepperresultsinyieldlosses，becauseofitssusceptibilitytomanypathogens，includingfun缸，bacteria，viruses，andnematodes，eta1.Recently，Breedingnewvarietiesfordiseaseresistancebygeneticengineeringtechniqueshasbeenanewstrategy.Thepromoterofprp1-1frompotatocouldbeinducedbymanypathogens，suchaslateblìghtdisease.Thepromoterofpψ1-1wasclonedfromthepotatoleafDNA.pBPR-2，theinducibleplantexpressionvectorcomprisingprpl-lpromoterandRs-AFP2gene，andpBCR-2，theconstructíveplantexpressionvectorcomprisingCaMV35SpromoterandRs-AFP2gene，wereconstructed.Rs-AFP2geneswithpBPR-2andpBCR-2wereintroducedintoBulgariajanjiaopepper，respectively.ThemainresuItsinthisstudyareindicatedasfollows:Thepromoterofprpl-lwasclonedfromthepotatoleafDNAbythemethodofPCR.pBPR-2，theinducibleplantexpressionvectorcomprisingprp1-1promoterandRs-AFP2genewereconstructed，asresultRs-AFP2genewasinducedtoexpressbyplantpathogenicfungiunderthecontroloftheprp1-1promoter企agment;Atthesametime，pBCR之theconstructiveplantexpressionvectorcomprisingCaMV35SpromoterandRs-AFP2gene，wereconstructed.‘AregenerationsystemofBulgariajanjiaopepperplantwasestab