血清标记物mz 6455.5da蛋白质多肽抗肝 癌作用及其机制研究-study on anti-liver cancer effect and mechanism of serum marker mz 6455.5 da protein polypeptide.docxVIP
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血清标记物mz 6455.5da蛋白质多肽抗肝 癌作用及其机制研究-study on anti-liver cancer effect and mechanism of serum marker mz 6455.5 da protein polypeptide
原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽抗肝癌作用 及其机制研究研究生王艳茹导师王家祥 教授 郑州大学第一附属医院小儿外科 河南郑州450000摘要背景目前,肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,死亡率紧随肺癌和胃癌之后, 位居高死亡率癌症的第三位。据资料显示,全球每年死于肝癌的人达 100 万,以 中国和日本为主。最近几年,肝癌的死亡率较往年明显增加,可见我国肝癌的高 发形势十分严峻。并且,因其极高的恶性程度和极快的病情进展速度,被科研 工组者们称为“癌中之王”。肝癌早期无任何症状,一旦出现症状,多数已是中、 晚期。肝癌病人的身心健康和生活质量构成严重威胁,预后与病理组织学分型、 临床分期、是否出现远处转移等多因素相关。终末期肝癌的转移与复发大大降 低了肝癌病人的生存质量和术后生存时间。截止目前,恶性肿瘤之所以仍是大 家心目中的“不治之症”,是因为缺少筛查和确诊指标,缺少能能直达药物靶 位的特异性药物。截止目前,已经应用于临床的化学合成药物在治疗癌症的同 时,对机体产生极大的损害作用。因此,探查有效、副作用小的生物治疗用药 成为科学家们研究的热点问题。血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽的生物活 性、对机体的副作用小等优点,吸引了科学家的目光。目的研究血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽的抗肿瘤作用及其机制。I材料与方法材料收集资料为未进行任何治疗的肝癌患者 60 例;资料来源于 2011.1 至 2015.6郑州大学第一附属医院病人,年龄为 45-65 岁,平均年龄 55.0+0.3 岁,均接受手术治疗,术后病理结果均为肝癌。此 60 例中有 18 例细胞类型为 HepG2,20 例细胞类型为 Bel-7402。其余 22 例为其他细胞类型。另收集住院行肝胆相关手 术,但肝功能各项指标均正常患者的肝脏组织 10 例,为正常对照。实验内容均 已详细告知参与实验的患者,且已征得其知情同意。收集病理类型为 HepG2、 Bel-7402 的肝癌组织各为 15 例、15 例,细胞类型为 7702 的正常肝脏组织 10 例。标记好信息后于 1h 内置于-80℃冰箱。方法①通过 CCK-8 法,将不同处理浓度的肽分别作用于肝癌细胞 HepG2 和 Bel-7402 细胞,孵育 24H、48H、72H 后,观察血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白 质多肽对肝癌细胞 HepG2 和 Bel-7402 的生长抑制作用;②免疫荧光染色法观察 血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽的作用部位及其不同处理浓度的血清标 记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽分别作用于肝癌细胞 HepG2 和 Bel-7402 细胞后 细胞状态的改变;③流式细胞技术观察血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽对 肿瘤细胞凋亡和细胞周期的影响;④Western Blot 方法检测与 Bax、Bcl-2、PCNA 等蛋白表达的变化,这些蛋白与凋亡紧密联系。统计学方法分析软件:SPSS17.0,实验数据表示形式:x±SD,对实验资料进行正态性 检验和方差齐性检验,两样本定量资料的比较采用 t 检验,多组定量资料的比 较采用单因素方差分析。P 0.05,差异有统计学意义。结果1 CCK-8 实验II1.1 α=0.05 时,孵育 24H、48H、72H 时,随着血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽浓度的增加,其对应的细胞抑制率逐渐增加,且随着血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质多肽浓度的变化,其对应的细胞抑制率之间的差异有统计学意 义(P 均小于 0.05);但孵育 48H 和 72H,与血清标记物 M/Z 6455.5Da 蛋白质 多肽浓度相对应的细胞抑制率之间的差异较小,故考虑,其细胞抑制率呈时间 依赖性,
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