血清反应因子在帕金森病发病中的作用和机制分析-analysis of the role and mechanism of serum reaction factors in the pathogenesis of parkinsons disease.docxVIP

血清反应因子在帕金森病发病中的作用和机制研究中文摘要血清反应因子在帕金森病发病中的作用和机制研究 中文摘要目的： 研究血清反应因子在帕金森病发病中的表达变化及可能存在的保护作用,并探讨其作用机制。方法：Lewis 大鼠背部皮下，连续 60 天注射鱼藤酮 2.0 mg/kg 建立帕金森大鼠模型。 在不同时间点，免疫组化以及 Western blot 检测 Lewis 大鼠黑质区血清反应因子（serum response factor, SRF）、酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）的 表达变化；鱼藤酮处理的高分化 PC12 细胞株，siRNA 干扰和质粒转染技术敲减和过 表达 SRF，Cell Counting Kit（CCK8）检测帕金森细胞模型中 SRF 敲减和过表达后 细胞活性的改变；Western blot 检测鱼藤酮细胞模型不同时间点 SRF 及自噬相关蛋 白 P62、LC3-II 的水平变化；鱼藤酮在 Atg5 敲减的 MEF 细胞株上诱导帕金森模型， 使用质粒转染方法构建 SRF 过表达模型，CCK8 方法检测细胞活性的变化；运用 siRNA 干扰及质粒转染方法敲减和过表达 SRF，Western blot 方法检测鱼藤酮细胞模型中 SRF、α-synuclein 以及自噬相关指标 P62、LC3 的水平变化；运用 ELISA 法检测 PD 患者及健康人外周血清的 SRF 含量。结果：鱼藤酮造模组 Lewis 大鼠黑质区 TH 和 SRF 呈时间依赖性下降；鱼藤酮 PC12 细 胞模型中 SRF 呈时间依赖性下降，LC3-II、P62 呈时间依赖性上升。siRNA 干扰后能 够抑制 SRF 的表达。鱼藤酮模型中 SRF 表达抑制后，细胞株对鱼藤酮的敏感性增高， α-synuclein 、LC3-II、P62 表达升高，质粒转染过表达 SRF 后，细胞对鱼藤酮敏 感性降低，α-synuclein、P62 表达降低，LC3-II 表达升高。在 Atg5 敲除 MEF 细胞 株鱼藤酮模型中，SRF 过表达后细胞对鱼藤酮的敏感性无明显改变。PD 患者外周血清中文摘要血清反应因子在帕金森病发病中的作用和机制研究SRF 含量低于正常组外周血清中含量。结论：1、在帕金森动物和细胞模型中均发现血清反应因子 SRF 含量呈时间依赖性下降。 PD 患者外周血清中 SRF 含量低于正常组。2、SRF 可能通过调控自噬起始环节促进α-synuclein 的清除，并对 PD 起到保护 性作用。关键词：血清反应因子；帕金森病；α-突触核蛋白；自噬。作者：程筱雨 指导教师：刘春风胡丽芳The role and underlying mechanisms of serum response factor in the pathogenesis of Parkinson’s diseaseAbstractObjectiveTo investigate the level of serum response factor in Rotenone-induced Parkinson model and PD patients, and to explore the potential role and underlyingmechanisms ofSRFin α-synuclein clearance and Parkinson’s disease pathogenesis.Methods:Both in vivoand in vitro PD models wereinduced by the neurotoxins rotenone. continuous subcutaneous rotenone injection was employed to construct Lewis rat model of Parkinsons disease. The co-localization of TH and SRF in SN of Lewis rat model was detected by immunofluorescence staining and DAB stainingWestern blot was used to evaluate the protein expressions of TH and SRF. Rotenone treated PD model in vitro was established in PC12 cells, and western blot was applied to examine the level of SRF, as well as a