一个与磁螺菌msr-1磁小体合成密切相关基因编码蛋白的定位-localization of a gene coding protein closely related to magnetosomes synthesis of magnetosomes msr - 1 of helicobacter pylori.docxVIP

ORF1proteinwasexaminedbyfluorescencemicroscopyafterthepositiveclonewereinducedforproteinexpressionwitharesultofonthemembraneofmagnetosomes.TheORF1‘wasPCRamplifiedwithgenomicDNAofM.gryphiswaldenseasatemplatethenclonedintothepET-29avector.TherecombinantplasmidpET-29a-ORF1‘wastransformedintoE.coliBL21andinducedforexpression.SDSprofileshowedtherewasnoclearincreasedproteinband.ResearchpreliminarilydemonstretedthattheproteinencodedbyORF1preciselylocatedonthemembraneofmagnetosomes.Theresultlaidafoundationfortheresearchofitsfunction,aswellasthefurtherresearchoftheroleofthe3073-bpanditsflankingfragmentinthebiosynthesisofmagnetosomeinMSR-1.KeyWords：magnetotacticbacteria,MagnetospirillumgryphiswaldenseMSR-1,magnetosome,localizationIII目录第一章文献综述11趋磁细菌的发现及一般特性11.1趋磁细菌的发现11.2趋磁细菌的一般特性12趋磁细菌的生态分布及其分离与培养22.1趋磁细菌的生态分布22.2趋磁细菌的分离与培养22.3几株典型菌株42.4一株特殊的趋磁细菌53趋磁细菌的分类及系统进化54趋磁细菌磁小体形成的分子机理64.1磁小体的主要特征64.2与磁小体合成有关的基因和蛋白84.3磁小体形成的分子机理125趋磁细菌的研究意义和作用135.1趋磁细菌的理论研究意义135.2趋磁细菌的应用价值136绿色荧光蛋白在微生物学研究中的应用13本课题研究的目标和主要内容151.2软件及分析方法162结果与分析172.1氨基酸序列特征分析172.2蛋白质疏水性分析172.3信号肽分析172.4跨膜结构分析192.5磷酸化位点分析192.6亚细胞定位212.7蛋白质基序分析212.8蛋白质二级结构预测212.9小结23第三章MSR-1磁小体合成密切相关基因编码蛋白的定位241实验仪器与材料241.1主要仪器241.2实验材料252实验方法272.1MSR-1基因组DNA的提取272.2MSR-1基因组DNA的检测272.3引物的设计282.4目的基因的扩增292.5凝胶产物回收302.6外源基因与pSURE-T载体的连接302.7大肠杆菌感受态细胞的制备312.8重组质粒转化大肠杆菌312.9细菌质粒快速检测322.10质粒DNA的提取322.11重组质粒的酶切鉴定332.12DNA测序332.13重组表达载体的构建332.14质粒的纯化362.15含重组载体的E.coliS17-1与磁螺菌MSR-1的接合362.16诱导表达362.17聚丙烯酰胺凝胶电泳372.18荧光显微镜检测383结果和分析393.1MSR-1基因组提取结果39PCR扩增ORF1和ORF1‘39PCR扩增EGFP和EGFP‘403.4PCR产物与T载体的连接与电泳鉴定403.5基因的序列测定413.6重组表达载体的构建结果433.7重组质粒导入MSR-1443.8SDS鉴定蛋白表达结果453.9讨论与总结46第四章小结49参考文献50附录56攻读硕士学位期间发表的论文60致谢61第一章文献综述1趋磁细菌的发现及一般特性1.1趋磁细菌的发现趋磁细菌的首次发现是个具有争议性的问题。1975年，美国学者Blackmore[1]在研究盐泽泥浆沉积物中的螺旋体时，在显微镜视野中意外发现有一些微生物总是向北极移动，便假设这可能与趋光性有关，但在黑暗中观察却依然如此，显然这不是趋光性所致。而当他将磁铁置于附近时，发现这些微生物全部向着S极移动。这表明这些微生物的移动是由地磁场所致。于是他把这种能够感应磁场而运动，表现出对磁场的趋向性的微生物叫做趋磁细菌(Magnetotacticbacterium)，这一现象称作趋磁性（Magnetotaxis）。实际上Blackmore的这一发现早在1963年就由意大利的一名医生SalvatoreBellini[2,3]作了阐释，他将研