阳虚质膝骨性关节炎关节软骨中pkc β-catenin mmp-13表达的相关性研究-correlation between pkc β - catenin mmp - 13 expression in articular cartilage of knee osteoarthritis due to yang deficiency.docxVIP

摘要目的：应用临床流行病学方法调查膝骨性关节炎（KOA）中医体质类型分布特点及相关发病因素，在确定KOA中高发体质类型为阳虚质的基础上，应用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法从分子水平探讨阳虚质膝骨性关节炎与蛋白激酶C(PKC)、β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属酶13(MMP13)表达之间的相关性。深入分析西北地区阳虚质膝骨性关节炎患者的相关发病机制，为阳虚质KOA的辨析提供客观依据，为中医药辨体防治该病提供新的思路和治疗靶点。方法：应用临床流行病学方法，参照《中医体质分类与判定》标准，制订“阳虚质膝骨性关节炎与Wnt/β-Catenin信号通路调体研究”统一设计的研究调查表。判定KOA患者中医体质类型，收集关节软骨标本，建立KOA患者中医体质数据库。在数据库中随机选取KOA病例组共20例，其中非阳虚质KOA10例，阳虚质KOA10例；正常非KOA患者对照组10例。应用文献循证方法选择在KOA的发病过程中，与关节软骨代谢密切相关的基因（蛋白激酶C、β-连环蛋白、基质金属酶13）。利用分子生物学研究，采用免疫组化及RT-PCR方法，检测三种基因在不同组别中的表达。分析KOA与健康对照组、阳虚质KOA与健康对照组、非阳虚质KOA与阳虚质KOA、非阳虚质KOA与健康对照组中三种基因的表达情况。结果：(1)在对406例膝骨性关节炎调查中发现阳虚质、气虚质、气郁质是膝骨性关节炎患者的常见发病体质，其中阳虚质164例，占40.39%，气虚质117例，占28.82%，气郁质65例，占16.01%。(2)免疫组化研究显示：PKC、MMP-13在正常关节软骨及阳虚质KOA与非阳虚质KOA中均有表达，表达主要位于细胞浆及细胞核内，组间进行两两比较，均具有明显差异（P＜0.05），具有统计学意义；β-catenin在正常对照组关节软骨中表达为阴性，在阳虚质KOA组与非阳虚质KOA组均有表达，表达主要位于细胞核内，病例组两者比较，无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。(3)RT-PCR研究显示：PKC、MMP-13基因在正常对照组与KOA病例组关节软骨组织中的表达进行比较，均具有显著统计学意义（P＜0.01）；PKC、MMP-13基因在阳虚质病例组、非阳虚质病例组与对照组进行两两比较（P＜0.05），差异均有统计学意义。β-catenin基因在正常对照组中无明显表达，与KOA病例组关节软骨组织中的表达进行比较，具有明显差异；β-catenin基因在阳虚质病例组、非阳虚质病例组之间进行比较（P＞0.05），差异无统计学意义。结论：（1）再次证实了阳虚质是KOA的高发体质类型。（2）PKC基因与KOA的发病有一定相关性，且可能与阳虚质高发KOA有密切相关性。（3）β-catenin基因与KOA的发病有一定相关性，但与阳虚质高发KOA无密切相关性。（4）MMP-13基因与KOA的发病有一定相关性，且可能与阳虚质高发KOA有密切相关性。关键词：膝骨性关节炎；阳虚质；蛋白激酶C；β连环蛋白；基质金属酶13；体质AbstractObjective:ThispaperaimstoapplytheclinicalepidemiologymethodtoinvestigatetheconstitutiontypedistributioncharacteristicsoftraditionalChinesemedicineandrelatedpathogenicfactorsofkneeosteoarthritis.BasedonthemedicaldiscoverythatYangastheniaconstitutionhasahighincidenceofKOA,thispaperprobesintothecorrelationofPKC,β-cateninandMMP-13inthearticularcartilageofthekneeosteoarthritispatientswithYangastheniaconstitutionatthemolecularlevelwiththeaidofimmunohistochemistryandRT-PCRdetectionmethod,makesathoroughanalysisoftherelatedpathogenesisofthekneeosteoarthritispatientswithYangastheniaconstitutioninnorthwestarea,toprovideanobjectivebasisforthediagnosisofthisdiseaseandanewideaandtherapeutictargetforthepreventionand