腰痹舒对兔椎间盘退变髓核组织tnf-α mmp-1及timp-1表达的影响-effect of yaobi shu on tnf - α mmp - 1 and timp - 1 expression in degenerated nucleus pulposus of rabbit intervertebral disc.docxVIP

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2018-06-03 发布于上海
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腰痹舒对兔椎间盘退变髓核组织tnf-α mmp-1及timp-1表达的影响-effect of yaobi shu on tnf - α mmp - 1 and timp - 1 expression in degenerated nucleus pulposus of rabbit intervertebral disc

中文摘要研究目的：观察腰痹舒汤剂对退变椎间盘髓核组织TNF-α、MMP-1及TIMP-1表达的影响，揭示腰痹舒汤剂治疗椎间盘退变是否通过调控TNF-α、MMP-1及TIMP-1的含量来实现，为明确中药腰痹舒作用机理提供依据。材料和方法：45只成年新西兰大白兔随机分为A（腰痹舒干预组）、B（对照组）、C（空白组）三组，每组15只，A、B组行造模处理，用注射器扎破腰4~6椎间盘并向内注射生理盐水0.2ml，C组行假手术处理。A组动物术后第8天开始给腰痹舒方剂，10ml/kg/日灌胃，至分批处死；B、C组动物复合饲料喂养，自由饮水，至分批处死。分别于造模后第2周，4周，8周，3个周期分批处死实验动物获取标本（处死前行腰椎X线摄片影像学观察），每组每次随机处死兔5只，将造模腰椎间盘组织取下，行大体形态学观察、组织学观察、MMP-1、TIMP-1免疫组化检测、TNF-α酶联免疫检测。结果：1、影像学观察结果：腰痹舒干预组及对照组各时期造模椎体X线影像示椎间隙变窄，椎体边缘密度影增高，有骨赘形成；腰痹舒干预组各时期造模椎体椎间隙狭窄程度、椎体边缘骨赘形成程度较对照组轻；空白组各椎体及椎间隙未见明显异常。2、形态学观察结果：腰痹舒干预组造模椎间盘变窄，周围少量骨赘形成，随观察周期的延长，未见明显加重；对照组造模椎间盘变窄，初期椎体周围少量骨赘形成，随观察周期的延长，造模椎间盘逐渐硬化，周围大量骨赘形成；空白组椎间盘及椎体未见异常改变。3、组织学观察结果：空白组：光镜下椎间盘形态规则，纤维环排列规整，髓核明显。腰痹舒干预组：术后2周纤维层宽厚，排列较规整，髓核存在；术后4周纤维环排列欠规整，髓核存在，椎间盘后缘出现透明软骨。术后8周纤维环排列错乱，髓核减少，2部分髓核被类骨质取代，椎间盘后缘可见透明软骨。对照组：术后2周纤维环排列欠规整，髓核减少，椎间盘后缘开始出透明软骨；术后4周可见纤维环破坏，髓核组织明显减少，类骨质大量增生；术后8周髓核基本消失，被增生的类骨质、骨质取代。4、免疫组化结果：空白组各周期MMP-1图像灰度值高，表明MMP-1表达不明显。各周期TIMP-1图像灰度值高，表明TIMP-1表达不明显。腰痹舒干预组2周MMP-1图像灰度值高，表明MMP-1表达不明显，随着周期延长，4、8周MMP-1图像灰度增低，表明MMP-1表达增加，与空白组相比有统计学差异（p0.05）；各周期TIMP-1图像灰度值高，表明TIMP-1表达不明显。对照组第2周MMP-1、TIMP-1图像灰度值高，MMP-1、TIMP-1表达不明显，随着周期延长，4、8周MMP-1图像灰度值低，MMP-1高度表达，与空白相比有统计学差异（p0.05），与腰痹舒干预组相比也有统计学差异（p0.05）；各周期TIMP-1图像灰度值较低，表明存在TIMP-1表达，与空白组及腰痹舒干预组相比均存在统计学差异（p0.05）。5、酶联免疫结果：术后第8周对照组中TNF-α表达较腰痹舒干预组及空白组明显增高，差异有统计学意义（p0.05），腰痹舒干预组中TNF-α表达比空白组高，差异有统计学意义（p0.05）结论：1.腰痹舒可通过对兔退变腰椎间盘中致炎因子TNF-α的抑制作用来减轻腰椎间盘的退行性改变。2.腰痹舒可通过对兔退变椎间盘内MMP-1表达下调作用来减轻腰椎间盘退行性改变。3.TIMP-1为MMP-1的特异性抑制剂，其表达与MMP-1表达成正相关，与腰痹舒无直接联系。关键词：腰痹舒；椎间盘退变；TNF-α；MMP-1；TIMP-13ResearchObjective:AbstractObservetheeffectofYaobishusouponTNF-α,MMP-1andTIMP-1expressionbythenucleuspulposusofthedegeneratedlumbarintervertebraldisc,exposewhetherYaobishusouptreatslumbarintervertebraldiscdegenerationbyregulatingthecontentsofTNF-α,MMP-1andTIMP-1,andprovidethebasisfordefiningtheactionprincipleoftheChinesepatentdrug,Yaobishu.MaterialsandMethods:Divide45NewZealandwhiterabbitsintothreegroupsinarandommanner,witheachgroupconsistingof15rabbits.PerformmodelingprocesstotheGroupA(Yaobishuinterventiongroup)andB(contro