一个新的烟草糖基转移酶基因sm-ngt1在转基因烟草中的功能研究-study on the function of a new tobacco glycosyltransferase gene sm - ng t1 in transgenic tobacco.docxVIP

中南民族大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权中南民族大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在年解密后适用本授权书。2、不保密√□。（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日第1章文献综述RNA、蛋白质作为基因表达的产物维持着整个生命的有序活动，任何基因表达调控程序上的缺陷或紊乱，都会影响生物体的正常生命活动。植物基因启动子通常仅位于基因上游，能指导全酶与模板的正确结合，活化RNA聚合酶，使之具有起始特异性转录的形式，并决定转录的方向和效率以及所使用的RNA聚合酶类型，是植物基因转录调控的中心，是理解基因转录调控机制和表达模式的关键。对基因表达的研究大多依赖于利用不同的启动子改变或调整转录的起始(Mijakovicetal.2005)。而对一个基因进行功能研究则有两种典型的方法——基因敲除和基因过表达，后者需要将目的基因与含有可诱导启动子的多克隆质粒融合(Heraietal.2004)。因此研究启动子结构与功能是研究基因表达及其功能的基础。1.1植物基因启动子人们在研究基因表达调控过程中经常忽略核心启动子在转录过程中具有的中心作用。核心启动子通常被定义为指导RNAPolⅡ准确起始转录的DNA序列。过去，人们大多假设核心启动子为单一功能的普通实体，但是随着最新研究发现它们的结构和功能都存在着广泛的差异。研究转录起始方式发现存在两种不同的转录起始——集中型和分散型(Juven-Gershonetal.,2006a,2008b)。集中型起始模式是指转录起始是在单个核苷酸或者几个核苷酸的狭小区域内开始的；而分散型起始是指在50~100个核苷酸的广泛区域内存在多个转录起始位点。一些启动子显示具有集中型和分散型两种起始方式，例如一个启动子可能存在一个特点的强起始位点和多个分散的起始位点。集中型转录起始存在于所有的生物体中，是生物体中单一的转录模式或者是主要的转录模式。但是在脊椎动作中，70%的基因是分散型启动子，特别是CpG岛广泛存在分散型启动子。通常情况下，调控基因与集中型启动子协同而组成型基因与分散型启动子协同。根据目的论观点，这种分配方式与一个转录起始位点更有利于调控一个基因的转录的观点相一致。相对应，存在多个转录起始位点有利于组成型基因多样化表达(Juven-GershonandKadonaga.,2010)。1.1.1核心启动子组成成分大多数分子机制研究表明RNAPolⅡ都是通过集中型启动子进行转录调控的。分析集中型核心启动子就需要研究它所包含的元件如TATA盒，BREu(上游TFIIB识别元件)，Inr(起始位点)，MTE(MotifTen元件)，DPE(下游启动子元件)，DCE(下游核心元件)，和XCPE1(X核心启动子元件1)(Fig.2).图1.1RNApolII识别的核心启动子结构(Juven-GershonandKadonaga.,2010)Fig.1.1SomecorepromotermotifsfortranscriptionbyRNApolymeraseII.起始子(Inr)包含转录起始位点，通常大多数存在核心启动子元件(Ohleretal.,2002;FitzGeraldetal.,2006;Gershenzonetal.,2006)。虽然有许多因子被发现能够与起始子相互作用，但是TFIID的结合对转录起始十分重要(discussedinSmaleandKadonaga,2003)。序列功能分析表明起始子在人类中的共有序列是YYANWYY(IUPAC核苷酸核心)、果蝇的共有序列为TCAKTY、拟南芥已经鉴定出具有一个YR起始子元件(Yamamotoetal.,2007b)以及在酿酒酵母中发现一个类似起始子序列(Yangetal.,2007)。集中型启动子中，Inr通常在转录起始“+1”位置上存在腺嘌呤，无论这个特定的核苷酸是否真正介导了转录起始。TATA盒是最早发现的核心启动子元件。多细胞动物TATA盒保守序列为TATAWAAR，上游T位于相对于起始子A+1位点-31或者-30位点(Carnincietal.,2006;Ponjavice