肝组织工程支架的构建及原代大鼠肝细胞的造就.pdfVIP

摘 要 内容摘要 通过近年来一系列动物实验和临床实验，生物人工肝支持系统的应用被证 明是有效的，但目前的人工肝系统还只能取代肝脏的部分功能，其仍有待于迸 一步完善。本文主要从构建具有良好生物相容性和高密度培养肝细胞的组织工 程三维支架，肝实质细胞与肝非实质共培养条件的优化，从而模拟体内肝细胞 的生长环境，优化体外肝细胞培养系统，提高肝细胞培养密度和代谢性能，为 生物人工肝支持系统优化进行探索。 分别以壳聚糖和海藻酸钠为材料，制备出乳糖修饰壳聚糖三维支架、海藻 酸钠／壳聚糖复合及共混三维支架、以及乳糖修饰壳聚糖／海藻酸钠复合三维支 架。支架形态利用倒置相差显微镜和扫描电子显微镜(SEM)进行观察，乳糖对 壳聚糖材料的修饰度用核磁共振法(NMR)测定，共混及复合物支架材料用红外 光谱法(FT—IR)分析，采用液体替代法测定多孔支架的孔隙率，采用增重法测 定复合物支架的复合度，通过杨氏模量对壳聚糖支架和海藻酸钠／壳聚糖共混支 架的机械强度进行了表征。 采用Seglen两步灌流法分离大鼠肝实质细胞和肝非实质细胞，活性高于90 ％以上的细胞用于支架材料相容性实验。肝细胞培养结果显示，孔隙率90％以 上，孔径50,2001_m的多孔支架为肝细胞聚集体提供了足够的生长空间，更大 的附着面积，同时又有利于营养成分和代谢产物的扩散。乳糖修饰的N一支链壳 聚糖支架，以及海藻酸钠／?L糖修饰壳聚糖复合支架上的肝细胞聚集明显，细胞 培养密度及代谢活性均明显高于未修饰壳聚糖支架，其中海藻酸钠／乳糖修饰壳 聚糖复合物支架上培养肝细胞白蛋白分泌和尿素合成量可分别达到81．7± 酸钠在促进肝细胞聚集方面都起着重要的作用。 采用肝细胞与肝非实质细胞混合培养时，进一步提高了肝细胞的代谢活性 以及肝细胞功能特异表达的时间，肝细胞白蛋白分泌和尿素合成量最大分别达 摘 要 到89．5±1．3p,g／l06cells／day和7．07+0．051unol／1 06cells／day。同时肝细胞保持较高 代谢活性的时间从4天提高到8天。 综上所述，本论文研制的三维多孔肝细胞培养支架和细胞培养条件的优化 达到了预期目的，为生物人工肝反应器的优化提供了参考。 关键词：壳聚糖 海藻酸钠 乳糖修饰壳聚糖 肝细胞聚集体 代谢活性 Ⅱ Abstract Abstract Bio-artificialLiver been studiedinthe system(BLSS)has support intensively are shouldbesolvedbeforeitcanbe in manyproblems put past．However,there nse．Porous scaffolds well clinical biodegradablepolysaccharidepossessing wouldbeanidealbiomaterialforclinical biologicalcompatibility applications． chitosanandsodium asraw chitosan Using alginate materials，lactose-modified suitablesizewere