磷酰化黄酮与钙结合型蛋白的弱相互作用研讨.pdfVIP

捧州大学囔惭捌I曩晴el文 摘要 细胞功熊多怒宙生耪分子之闻的弱稳夏作用弓l起瓣，它们包括：酶与底物之 间，蛋白质与瓢体之间，蛋白质与蛋白质之问以及抗体与抗原。在生物体中，蛋 包猿是必不可少豹生命物馥，在生命的运渤釉发展延续中起羞重要的撵塌。有关 蛋岛璜构象、缀成结构、趺及稻小分子稻互作孀的视瑗，是目前生愈秘学、亿学 和临床医学中燕同关注和感※趣的课题。近年来，由于医药学和生命科学的发展， 磷究小分子，茏其是具有药效的，3、分子与聚自矮的耱互{警瘸壤理过程，对药代动 力学认识和开发新药有极其整要的意义。自从电喷雾质谱闯世以来，它已经成为 一种检测气相中跟大分子相关的弱相互作用的有力工具。 谗多事实表明磷酸骏及茨醚类衙生物太多其奏广泛鹃生携活牲，在谗多生理 邋程中起着非常踅要的作用。黄酮类亿合秘与大分予的作用比较弱，作为有祝磷 小分子化合物，其磷酰酯类衍生物大多具肖广泛的生物活性。本文将缝改造的并 竣楚他的Athe∞m恻d反疯扩大到黄酮霜黪黄酮兹磷黢位结橱改建上，选择了 7一羟基黄酮，5，7一二羟基黄戮，成功合成了～系列耨的磷酰纯黄酮。 本文以现代生物质谱ESl，开展了4种磷酰化黄酮和黄酮的与d一乳白蛋白蛋 自发生嚣稳互俸麓酌硬究，醛|凌谱法戆缭聚显示了4秘磷酸诬黄醪产物戆确链 够和n一乳白蛋融发生弱相互作用，它们跟a一乳白蛋白不同程度的缩合，证明它 们与旷乳白蛋嘲之间有着有较强的亲和力。而我们在相同的EsI质满条件(甚 至镶强毫压要甄)一F捡灞蓑藜本身与旷嚣是蛋叁熬弱麟互终曩，却寒发臻复合 物的存在。确立磷酰基在分子与蛋自发生栩互作用时的关键性的作用。提高锥孔 电压其实就是提高了复合物的内能，使其变的不稳定。本文将取样孔的电压(锥 强邀莲)没置缓莲(接遥12瓣)，嚣仍糍麓察蘩复台物瓣存在，这靛蘧鞠，覆一 乳白蛋白与4种磷酰化黄酮形成的复合物的结合能相对较强。此事实蕊进～步证 明了经过磷酰化修饰的黄酮的生物活性得到提高，也因丽更有可能成为～种潜在 熬接溺裁。 除了a一乳白蛋白，本文还用荧光法研究r磷酰化黄酮与另外一一种钙离子结合 性缀白——钙调索蛋白之间的弱相互作用。本文参考文献从牛脑、牛心中分别提 郑州大孽嘎士掌位·呛文 取了钙调素蛋白和磷酸二酯酶。并通过垂直平板电泳确定了两种蛋白质的分子 量，与文献报道的两蛋白质的分子量相符。本文测量了钙调素蛋白对磷酸二酯酶 的激活活性，发现本文所提的钙调素蛋白能使磷酸二酯酶的活性提高至原来的4 倍，这说明本文所提钙调素蛋白和磷酸二酯酶有一定的纯度适中。 此外，本文还用荧光法研究了黄酮及其磷酰化后的产物在液态环境中和钙调 素蛋白的相互作用情况，以及磷酰化黄酮对cAMP信号传导系统的干预。结果 显示磷酰化黄酮能够和钙调素蛋白发生弱相互作用，与黄酮相比磷酰化后的黄酮 对蛋白更具亲和力。并根据荧光猝灭双倒数图计算了磷酰化黄酮与钙调素蛋白之 间的结合常数。同时，磷酰化黄酮对cAMP信号传导系统确实有一’定的影响， 这是因为磷酰化黄酮与钙调素蛋白发生的弱相互作用，影响了钙调素蛋白对磷酸 二酯酶的激活作用。 关键词：荧光法；电喷雾质谱法；a一乳白蛋白；钙调素蛋白；弱相互作用 螂州大善峨出啦位论文 ABST酞ACT Cellularfhncdonsare weaknon—cOVal翩t Onen龋ggeredby ellzyrn伽substrate， theoourseofrnoVementand a辩vital吼lbstances，beingv髓yimportantduring of1ife．1meme浊ani锄sabout constitlltesand d删elopment pr。teins’s咖曲玳and 激e{ntcfac畦黼wi魄sm羹l in钯feStedli是seion矗sts秘d mole瓣les瓣￡opicsby