落射荧光显微术高通量剖析单细胞中的酯酶.pdfVIP

力：J、学痂!I学ffri亡芝 中文摘要 本论文用落射荧光显微术对印细胞分析进行了～些研究。共分三章：第一章． 落射荧光显微术检测胃癌细胞中的酯酶。第二章．落射荧光显微术高通量检测唯 个胃癌细胞中的酯酶。第三章．高通垦微流控芯片分析单个胃癌细胞巾的酯酶。 第一章我们采用落射荧光显微术对胃癌细胞提取液中酯酶的活性进行了鉴 J地 定。在这部分实验中是以FDA作为底物，FDA这种物质可以通过细胞膜乩l 渗透到细胞里面去，在细胞内酯酶的催化作用下发生反应产生一种新的物质，这 种物质在激光的激发下会产生荧光，我们通过分析这种生成物质的荧光姒度束实 现对酯酶的测定。我们首先对实验的最佳条件进行研究，包括采用底物FDA的 浓度、缓冲溶液的pH、FDA在醣酶作用下反应的时间与生成物质荧光强度之fflJ 的关系等。最终通过标准曲线法进行定量。 第二章我们用落射荧光显微术高通量检测单个胃癌细胞t{|的艏舱，研究了一 种高通量检测细胞的方法．我们将细胞在灭菌之后的反应池叶1贴壁以后，加入 FDA溶液进行孵育．FDA会自由地渗透到细胞里面去，在细胞内酯酶的作用下 产生一种物质。我们通过分析这种物质的荧光强度来检测细胞内的酯晦。在这部 分实验中我们对底物的浓度、反应H于『BJ等进行了研究。根据标准曲线法对单个细 胞中的酯酶活性进行了高通量测定。 第i章我们用微流控芯片通j生落射荧光显微镜对细胞中的脯所进行了扇洒 量分析。在这部分实验中，我们自己制作了微流控芯片，芯片通j吐采用PDMS腆 制成，然后将膜封接到盖玻片上。以FDA作为细胞-f·酯酶的底物，我ffJ利川这 种简易微流控芯片x,I Lh酯酶引起反应产生荧光信号的细胞进行了商通量分析。 主题词：落射荧光显微术、高通量、微流控芯片、单细胞分析 I』东人中硕I‘中f●论定 Abstract Thisthesis ofesterase consistsofthree activityby parts：I．Determination II．Determinationof esterase epi—fluorescence activityby microscopy． hi曲一throughput epi-fluorescencespectroscopy．III．Ahigh-throughput single-cell for fluorescence methodwitha microfluidic spectroscopy chip single-ceU fluorescence． was In esterase intheextractsofMGC803determined I，the by Chapter activity this FDAWasusedasthe substrate．A cpi·fluorescence part enzyme microscopy．In