为有机磷农药残留的快速分析提供一种简便.PPTVIP

食品质量安全检测技术;目录;一．食品生物性污染的检测技术;1．2纸片荧光法 纸片荧光法是利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—一底物反应法，其优点是测试纸片生产工艺简单，简化了实验准备、操作和判断，准确度也较高。可以制作商品化测试纸将待测细菌所需的营养成分、酶促底物以及抑制杂菌的成分均固相化在纸片上．通过检测有关酶的活性来检测食品中的大肠菌群和大肠杆菌，检测时将荧光产物在365nm紫外光下观察即可，只需24小时即町获得检测结果。;1．3分子生物学检测方法 聚合酶链式反应(PCR)是近年来在分子事物学领域中得到迅速发展和广泛应用的一种技术。PCR技术检测细菌的基本原理是应用细菌遗传物质中各菌属菌种高度保守的核酸序列设计出相关引物，对提取到的细菌核酸片段进行扩增，进而用凝胶电泳和紫外核酸检测仪观察扩增结果。利用PCR技术对食品中的致病性蜡样芽孢杆(Bacilluscereus)进行了检测，检出限可达9cfu／ml，与常规的生化检测方法相比具有省时省力的特点且灵敏性较高。NiissonA．等提出了一种用PCR技术测定食品中鼠疫杆菌的方法，可在细菌数为105～106的猪肉中检测出102个目标菌株。;1．4免疫学方法 免疫学方法通过抗原和抗体的特异性结合反应，再辅以免疫放大技术来鉴别细菌，其优点是样品在进行选择性增菌后．无需分离即可采用免疫技术进行筛选。免疫法灵敏度较高，样品经增菌后可在较短的时间内达到检出度，抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成。目前主要的应用有： ①应用免疫磁珠捕集法检测食品中单增李氏菌，检测结果与实际相符而且基本不受干扰菌影响。 ②应用胶体金免疫层析法快速检测食品中沙门氏菌，结果令人满意。 ③利用ATP生物发光分析技术和体细胞清除技术，测量肉制品中细菌ATP和体细胞ATP，对于鲜肉类食品，须先清除体细胞ATP，分析测量时间需15分钟，对于熟肉制品，无需清除体细胞，分析测量时阆只需4分钟，测量细菌的下限为103cfu／g。 ④应用微型自动荧光酶标分析法检测食品中沙门菌，检测时间与常规法相比提前2-3天． ;1．5细胞计数法 细胞计数法卡要包括流式细胞计数法(flowcytometry，FCM)和固相细胞计数法(solidphasecytometry，SIC。这两种方法通常都用激光作为激发光源，被荧光物质标记(染色)过的微生物或细胞在激光束的照射下产生激发荧光，仪器通过对荧光信号的检测来估计微生物或细胞的大小，形状和数量。 ;1．6基因芯片技术 基因芯片技术是一种反向固相杂交技术，具有微型化、高通量、平行处理、易于自动化等优越性。采用基因芯片技术对检测环境中常见致病菌的初步研究，检测准确率达96．2％。芯片制备的成本高，使用率低和浪费严重等缺点在一定程度上限制了基因芯片技术的应用，但是随着芯片技术的不断发展和完善，基因芯片技术在食品卫生微生物检测领域中的应用前景会越来越光明。 ;二．食品化学性污染的检测技术;2．2 化学快速检测法 化学快速检测技术原理是有机磷农药(磷酸酯．二硫代磷酸酯，磷酞胺等)任金属催化剂作用下水解为磷酸与醇，水解产物与检测液反应可使检测液的紫红色褪去，根据检测液色阶的变化可以检测蔬菜中有机磷农药的残留水平。根据此技术研制出了农药残留速测灵。其检测灵敏度为0．18～l0mg／kg，检测时间为5—10分钟，检测成本为0．2—0．3元人民币/每次。;3酶活性抑制——分光光度法 酶抑制技术是研究比较成熟、应用最广泛的微量和痕量农药残留快速检测技术，其原理是有机磷氯基甲酸酯类农药对乙酞胆碱酯酶(ACHE)的特异性生化反应。乙酞胆碱酯酶水解后，水解产物可与硅色剂反应产生颜色，有机磷及氯基甲酸酯类农药对乙酞胆碱酯酶的特异性抑制作用，使其不能水解，从而无显色反应。依据此原理，国内外已研制出多种方法．如速测卡法．速测片法，农药残留分光光度法，电化学生物传感器法等。农药残留分光光度法的计算公式如下：酶抑制率％=处理液吸光度，空白液吸光度x100=klg(待测物浓度)+b式中k，b为常数。目前市场上应用最多的是农药速测卡法，此方法操作简便、不需要配制试剂、不需要仪器，检测卡片携带方便，特别适用干对农贸市场上的蔬菜进行初筛，该方法的检出限大多在mg／kg水平，有的可达u g/kg水平。应用酶活性抑制一分光光度法对蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行了快速测定，并与气相色谱法进行了对比，发现在检出的32份抑制率大干50％的阳性结果中，与气相色谱法的符合率为81．2％，符合国家标准。将胆碱酯酶抑制法用于检测辛硫磷农药残留，结果表明胆碱酯酶对辛硫磷比较敏感，辛硫磷的抑制中浓度(抑制率为50％时浓度)3．90u g/l。 ;2．4酶联免疫吸附测定法(enzyme-一tassay,ELISA)酶联免疫吸附测