儿童新甲型h1n1流感疫苗接种后远期抗体及th1th2细胞因子分泌的研究-study on long-term antibody and th1th2 cytokine secretion after vaccination of childrens new influenza a ( h1n1 ).docxVIP

儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后远期抗体及Th1/Th2 因子分泌的研究中文摘要目的：检测儿童接种新甲型H1N1流感疫苗后远期血清抗体水平，评价其体液免疫持久性；检测儿童新甲流疫苗接种后疫苗再刺激T细胞亚群分泌细胞因子情况，探讨疫苗接种后远期T细胞免疫记忆；为新甲流疫苗免疫策略提供理论依据。方法：(1) 选择2009年12月～2010年1月新甲型H1N1流感疫苗接种儿童的健康志愿者31名，每名志愿者抽取5ml外周血；其中2ml待自然凝后离心分离血清，用ELISA 法检测H1N1 流感抗体；(2)取3ml外周血分离淋巴细胞，用10%FBS-RPMI-1640液调整细胞数为1×106个/ml，设新甲型H1N1流感疫苗组(实验组)与正常细胞组(对照组)，置5%CO2 培养箱，37℃，培养50 小时，取上清液检测细胞因子；结果：(1)用ELISA法检测血清中抗体水平：依据公司提供的人血清H1N1-Ab浓度正常范围，31例接种疫苗儿童4年后的抗体阳性率16.13%，抗体浓度均值为70.41ng/L，同时极大值和极小值分别为282.91ng/L和7.73ng/L，极差达275.18ng/L，表明抗体水平总体差异大，标准差79.85ng/L，由此对样本H1N1-Ab数据进行Wilcoxon符号秩和检验，P0.05，尚不能认为研究对象血清H1N1-Ab水平高于正常人。(2) 用流式CBA 法检测淋巴细胞培养后上清中TNF-α 水平，对照组中位数90.41pg/ml明显高于实验组的6.54pg/ml。样本数据采用kolmogorov-smirnov检验，发现数据资料非正态分布，P0.05，采用Wilcoxon 符号秩和检验，实验组和对照组秩均值分别为16.24和12.50，结果差异具有统计学意义，P0.05。(3)用流式CBA方法检测31 例标本细胞培养后上清中IL-10水平，实验组明显低于对照组，中位数分别为199.82pg/mL、1704.56pg/mL。两组结果经过Wilcoxon符号秩和检验，差异具有显著统计学意义，P﹤0.05。(4) 接种疫苗儿童细胞培养后16 份(奇数号)细胞培养液，用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α 水平：结果实验组和对照组标本IFN-γ 均值分别为176.22 pg/mL、2185.71pg/mL；TNF-α均值分别为152.29pg/mL、173.34pg/mL；差异均无统计学意义，P0.05。(5)接种疫苗儿童细胞经过培养后16份(奇数号)细胞培养液，用ELISA法检测IL-4、IL-10水平，结果实验组和对照组的IL-4均值分别为224.03pg/mL、225.95pg/mL；IL-10均值分别为180.68pg/mL、405.31pg/mL，差异具有统计学意义，P0.05。结论：(1)31例儿童接种新甲流疫苗4年后的抗体水平阳性率16.13%，抗体浓度均值为70.41ng/L，儿童接种新甲流疫苗4年后特异性体液免疫不强。(2)31例儿童接种新甲流疫苗4年后的Th1/Th2细胞因子检测正常细胞具有良好分泌功能，而实验组细胞因子水平低于对照组，表明疫苗特异性免疫记忆功能不强，远期免疫记忆效果欠佳。关键词：儿童；新甲型(H1N1)流感疫苗；接种；抗体；Th1/Th2细胞因子3Studyonthechildren’slongtermantibodylevelandsecretionof Th1/Th2cytokinesafterimmunizationwithH1N1influenza vaccineAbstractObjective:Inordertoprovideatheoreticalbasisforthenewinfluenzavaccineimmunizationstrateg,wedetectthechildren’slong-termserumantibodylevelsafterimmunizationwithnewH1N1influenzavaccineandevaluatethehumoralimmunepersistence,wedetectthecytokinelevelsofTcellsubsetsinchildrenwithvaccinatedthenewH1N1influenzavaccineandexplorethelong-termpost-vaccinationimmunememoryofTcells.Methods:31healthyvolunteerchildrenwithvaccinatedthenewH1N1influenzavaccinewas collected.5mlperipheralbloodwasdrawnfromeverychild.Wece