与辣甜椒抗根结线虫mel基因紧密连锁的estssr分子标记的开发-development of est ssr molecular markers closely linked to sweet pepper root knot nematode - resistant mel gene.docx

论文独创性声明1: 111111\1\\1\\\11\\1\\\11\1\\\111\\\\\1\1\\1\1\\111Y1801344本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个 人戚集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机 构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:私牙 -VOO年 6 月到日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留井向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被资阅和借阅，可以采用影印、缩印成扫描 等复制手段保存、汇编学位论文.同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容.〉。ω 年 6 月 l-I 日 )(110 年 6 月均日中文摘要根结绒虫是辣(甜〉椒的主要病害之一，其危害日趋严重。培育抗性品种是防治 根结线虫最有效的方法，常规育种周期长、消耗大，利用分子标记辅助育种则会大大 提高育种速度。 EST.SSR 作为一种新型分子标记，来自表达基因，除具备传统基因组 来源的 SSR 标记所有优势外，还可能与基因功能具有直接或间接关系，从而强化了 SSR 标记在遗传研究中的应用。本研究以辣椒 EST 数据为基础，通过分析辣椒囚下 SSR 位点信息，建立了部分 辣椒 EST.SSR 标记，并开发与辣椒抗根结钱虫显性单基因 Mel 紧密连锁的分子标记， 为协l基因的标记辅助选择奠定基础。主要研究结果如下:1.利用SS阳软件(ht甲://附lgremene/searchesl ssrtool)从NCBI(htψ:l//dbES%CE%B7/dbESη 数据库中 19173条辣椒m丁序列中筛选到 612 个SSR，检出率为31.9%。共观察到51种重复基元，其中三核昔酸基序是主导类型， 占总SSR的60.46%; AG/GAlCTrrC ，AAG/AGAlOAAlCrrrrrC厅C丁， TAAT，ATATA 和CTOC丁C分别是二、三、四、五和大核昔酸基序的优势震复基序，在所有 SSR中的 出现频率各自为 13.40%、16.18%、180.%、327.%及2.12% 。辣椒巴S丁:SSR以ι10次重 复为主，基序长度集中在 15-20bp范围内。2. 利用筛选出含 SSR 的 576 条 EST 序列，设计了 357 对引物，在合适的 PCR条件下，利用非变性聚丙烯酌肢凝胶银染检测这些引物在 6 个辣(甜)椒品种中的扩增情况和多态性。其中有 337 对引物显示出清晰条带，引物有效扩增率为 94.40%;75 对引物表现多态性，占有效扩增引物的 21.01%。3. 用含抗根纺线虫病基因胁 l 的 PM217 与典型感线虫品种茄门，及其町、 F2 代为试材，采用南方根纺线虫 (Meloidogyne spp.)人工接种鉴定，每株接种 2000 卵， 两个月后进行抗病性鉴定，根据鉴定结果，利用分离群体分组分析法(b川 ked segregant analysis ，BSA)建立抗感池，躲筛选到 4 对 (118、141、142 及 211) 多态性 ES丁·饥民 引物在抗感池间存在差异，分别将该 4 个标记位点暂命名为 118、141、142 及 21104. 利用 Joinmap3.0 软件，结合抗病性鉴定，对 271 个单株的巴群体进行 SSR 分 析，研究 4 个囚下SSR 标记位点与根结线虫抗性基因胁 l 的连锁关系，结果表明， EST.SSR 标记 141、118 及 211 与 Mel 连锁程度较高，遗传距离分别为 6.984 cM、18.684cM 和 29.3 10cM。关键词:辣椒;根结线虫:分子标记 ;M 旨基因:囚下SSR//nAbstractRoot-knot nematode is one of the main disease of pepper，having brought increasingly serious harm. The most effective wayωcontrol this disease is breeding resistant pepper. Traditiona1 breeding has the disadvantage of long cycle and high cost，and molecular mark 邸sisted breeding will great1y improve effi