与前列腺癌相关蛋白elac2hstrz2同源的裂殖酵母trna3末端加工酶sptrz1p的温度敏感型突变体的构建-construction of a temperature-sensitive mutant of schizosaccharomyces trna trna 3 terminal processing enzyme sptrz1p homologous to prostate cancer-related protein el.docx

端的成熟主要由核酸外切酶RNaseT和RNasePH加工完成但也有内切酶参与到其中（图2B）。在Bacillussubtilis中，约有三分之二的tRNA基因编码末端CCA序列，含有末端CCA序列的tRNA前体3末端的加工类似于E.coli中的tRNA前体3’末端的加工，而不含有末端CCA序列的tRNA前体3末端的加工则是由核酸内切酶tRNaseZ完成。tRNaseZ能在“区别碱基”（discriminatornucleotide，位于CCA5的未配对核苷酸）后精确切割tRNA前体3末端序列图(2Ai)(Schiffer,etal.,2003)。CCA是tRNaseZ内切酶活性的强抑制子，可以防止CCA被反复合成和切除(Mohan,etal.,1999,Vogel,etal.,2005)。但有趣的是，在一种海栖热袍菌Thermotogamaritima中tRNaseZ可以切除到CCA的3端，T.maritima有46个tRNA基因，其中有45个编码CCA序列，这45个tRNA前体3’端加工时由TmaTrz在CCA的3端进行剪切，将CCA留在tRNA3端(图2Aii)；一个不编码CCA序列的是tRNAMet，由TmaTrz在“区别碱基”后进行切割。TmaTrz将CCAmotif作为了切割的指导序列而不是被其抑制。(Minagawa,etal.,2004)。在古生菌（archaea）中，绝大多数tRNA基因不编码末端CCA序列，tRNA前体3末端的加工由核酸内切酶tRNaseZ完成(Schierling,etal.,2002)。相对于原核生物体，我们对真核生物体中的tRNA前体3末端加工机制的研究尚处在初步阶段。真核生物体中的tRNA基因不编码末端CCA序列，tRNA前体3末端的加工主要通过核酸内切酶tRNaseZ完成。近来在芽殖酵母Saccharomycescerevisiae和粟酒裂殖酵母Schizosaccharomycespombe中发现，当酵母La蛋白存在条件下，tRNA前体3末端的加工通常由核酸内切酶完成(YooWolin,1997,Huang,etal.,2006)。La蛋白是一种普遍存在于真核生物中的很丰富的RNA结合蛋白，La蛋白通过识别和结合tRNA前体3末端寡聚尿苷酸残基（oligo(U))保护tRNA前体的3末端，以防核酸外切酶的降解，酵母La蛋白能促进依赖于tRNaseZ的tRNA前体3末端的加工(YooWolin,1997,Intine,etal.,2000,Huang,etal.,2006)。图1tRNA加工的2种途径。5末端的成熟均由RnaseP催化。tRNA3末端的成熟分为1（左）由内切酶tRNaseZ完成，2（右）由外切酶完成。去除3端多余序列后再由tRNA核苷酸转移酶添加CCA。许多真核生物和古细菌tRNA基因有内含子，需要由剪接内切酶去除，有些核苷酸还需要特殊的修饰。D表示区别碱基discriminatornucleotide，位于CCA5的未配对核苷酸图2原核生物tRNA3加工的2个主要途径。（A）一步式反应（i）由tRNaseZ一步切除至“区别碱基”D，（ii），T.maritima的TmaTrz一步切除至CCA序列的3端。（B）多步式反应，大肠杆菌中的所有tRNA基因都编码CCA，其tRNA前体3末端多余序列先由核酸内切酶RNaseE剪切，当5前导序列由RnaseP切除之后，3再继续由核酸外切酶RNaseT和RNasePH剪切。第二节tRNaseZ的结构与功能tRNaseZ存在于细菌、古生菌及真核生物中，有两种类型，长型（tRNaseZL）含有750-930氨基酸残基，只存在于真核生物中；短型（tRNaseZS)含有280-360氨基酸残基，可存在于上述三界生物中(Schiffer,etal.,2002,Takaku,etal.,2004)。三界生物中所含有的tRNaseZ的类型和数目还不一样。一般来说，真核生物至少含有一种tRNaseZL，例如线虫Caenorhabditiselegans、黑腹果蝇Drosophilamelanogaster和芽殖酵母S.cerevisiae都只含有一种tRNaseZL,不含有短型tRNaseZS，人有一个tRNaseZS（HsaTrz1/ELAC1)和一个tRNaseZL(HsaTrz2/ELAC2)，粟酒裂殖酵母S.pombe有两个tRNaseZL；拟南芥A.thaliana有两个tRNaseZL和两个tRNaseZS(HopperPhizicky,2003,CeballosVioque,2007)。蛋白亚细胞定位研究发现，芽殖酵母的tRNaseZL位于细胞核和线粒体中(Huh,etal.,2003)，裂殖酵母的2个tRNaseZL分别定位于细胞