玉米zmcbl家族在逆境胁迫下的表达分析与zmcbl2-1的功能鉴定-expression analysis of maize zm cbl family under stress and functional identification of zm cbl 2 - 1.docxVIP

Key words: Maize; CBL; Abiotic stress; Expression analysis; Functional characterizationDirected by: Prof. WANG MaoyanApplicant for Master Degree: WANG Cunfang(Genetics)(College of Life Sicence. Inner Mongolia Agricultural University. Hohhot 010018.China)目录1引言 11.1植物细胞中的 Ca2+信号及其传递 11.1.1植物细胞中的钙 11.1.2Ca2+信号的产生与传递 11.2CBLs 在植物中广泛存在 2CBLs 的结构特征 2CBLs 的靶蛋白 31.3CBLs 基因的功能 31.3.1参与盐胁迫信号途径 31.3.2参与干旱、低温胁迫信号途径 51.3.3参与低 K+胁迫信号途径 51.3.4参与 ABA 等信号途径 51.3.5玉米 CBLs 5实时荧光定量 PCR（Real-time quantitative PCR，RT-qPCR） 6RT-qPCR 的原理 6RT-qPCR 的常见方法 7RT-qPCR 的应用 71.5本研究的目的和意义 82RT-qPCR 82.1实验材料 82.1.1植物材料及处理 82.1.2酶及试剂 82.1.3溶液的配制 82.2实验方法 9总 RNA 的提取 9RNA 的纯化 10cDNA 的合成 10RT-qPCR 112.2.5数据分析 122.3结果与分析 122.3.1 总 RNA 的提取与检测 122.3.2ZmCBLs 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL1 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL2-1 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL2-2 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL6 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL8 在不同胁迫条件下的表达动态 ZmCBL10 在不同胁迫条件下的表达动态 223ZmCBL2-1 基因的克隆与功能研究 243.1实验材料与方法 243.1.1实验材料 植物材料与载体 酶及试剂 培养基及相关溶液 引物 243.1.2实验方法 24总 RNA 的提取 24RNA 的纯化 25cDNA 的合成 基因克隆与测序 序列分析 2表达载体构建 2转化拟南芥 2转基因植株的筛选与繁殖 30 转基因植株基因组 DNA 的提取（SDS 法） 30转基因植株的 PCR 检测 30转基因株系的 RT-PCR 检测 32转基因株系的表型鉴定 313.2结果与分析 313.2.1基因克隆与序列分析 3总 RNA 的提取与检测3基因克隆 3序列分析 323.2.2植物表达载体的构建 343.2.3转基因拟南芥的获得与分子检测 3转化农杆菌及抗性植株筛选 3T1 代阳性植株的 PCR 检测 3转基因拟南芥的 RT-PCR 分析 3转基因株系的表型鉴定 374讨论 394.1RT-qPCR 的敏感性与可靠性 394.2ZmCBLs 参与对多种逆境胁迫的应答反应 394.3ZmCBLs 的生物学功能 405结论 40致谢 42参考文献 43作者简介 481.图 1CIPK 结构图 32.图 2盐胁迫 SOS 途径中离子稳态调节的过程 43.图 34℃处理的玉米叶子和根总 RNA 124.图 4NaCl 处理的玉米叶子和根总 RNA 125.图 5ABA 处理的玉米叶子和根总 RNA 136.图 6PEG 处理的玉米叶子和根总 RNA 137.图 7低钾处理的玉米叶子和根总 RNA 138.图 8缺氮处理的玉米叶子和根总 RNA 139.图 9NaCl 胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1410. 图 10PEG 胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1411. 图 114℃胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1512. 图 12ABA 胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1513. 图 13缺氮胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1514. 图 14低钾胁迫下 ZmCBL1 的表达变化 1515. 图 15NaCl 胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1616. 图 16PEG 胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1617. 图 174℃胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1618. 图 18ABA 胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1619. 图 19缺氮胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1720. 图 20低钾胁迫下 ZmCBL2-1 的表达变化 1721. 图 21NaCl 胁迫下 ZmCBL2-2 的表达变化 1822.