耐重金属铅和镉微生物筛选.docVIP

耐重金属铅和镉微生物筛选 　　摘要:从污染的土壤中筛选出耐Pb、Cd的微生物共22株,其中真菌菌株为1~10号,细菌菌株为11~22号,真菌和细菌耐重金属Pb浓度分别达到了1500和500mg#8226;kg?-1?,耐Cd浓度分别达到了600和700mg#8226;kg?-1?,耐重金属Pb、Cd复合污染的浓度均达到了1200和600mg#8226;kg?-1?;经过液体培养对Pb、Cd降低效果的测试,发现22株菌对液体培养基中的Pb、Cd都有一定的去除效果,其中1号、2号、6号对Pb的去除率均在60%以上,其菌丝体内Pb的含量分别为22.52mg#8226;kg?-1?、7.39mg#8226;kg?-1?、0.4mg#8226;kg?-1?,而1号菌株对重金属Pb的去除率高达72.45%。 　　关键词:微生物;Pb、Cd;去除率 　　 　　收稿日期:2010-06-12 　　作者简介:曹 霞(1980―),女,内蒙古人,研究实习员,主要从事蔬菜育种工作。 　　 　　中图分类号:X53 　　文献标识码:A 　　文章编号:1674-9944(2010)07-0118-03 　　 　　1 引言 　　 　　在长期受某种或多种重金属污染的土壤上,有一定数量的、能抗或耐重金属污染并能富集、氧化或还原重金属的微生物类群。因此,在污染区往往可以发现大量的耐受微生物群体。 　　在As、Cd、Cr、Cu、Pb、Ni、Zn复合污染土壤中,重金属总量达到658mg#8226;kg?-1?时,细菌和真菌数量分别为对照(1210mg#8226;kg?-1?)的29%和45%,当重金属总量为3447mg#8226;kg?-1?时,其分别下降为81%和85%。而且不同类群微生物对重金属污染的耐性也不一样,通常由大到小为真菌细菌放线菌。目前大部分研究都是从水体和有机污染的土壤中筛选,从重金属污染的土壤中筛选耐高浓度且高效富集的菌株很少,且耐重金属浓度仍需提高。 　　 　　2 材料与设计 　　2.1 实验材料 　　2.1.1 土壤 　　筛选菌种的土样取自湖南株洲,铅(全量)为132.5mg#8226;kg?-1?,镉(全量)为4.56mg#8226;kg?-1?。 　　2.1.2 培养基 　　牛肉膏蛋白胨(分离细菌)和PDA马铃薯蔗糖培养基(分离真菌)。 　　2.1.3 溶液 　　Pb(NO3)2溶液,Cd(NO3)2溶液(采用分析纯Cd(NO3)2试剂)在121℃下灭菌30min,备用。 　　2.2 方法 　　2.2.1 测定方法 　　采用稀释平板涂布法和液体培养法,用火焰原子吸收分光光度法测定Pb、Cd;。重金属去除率的计算公式如下: 　　重金属去除??(%)= 　　空白对照组重金属离子含量-菌处理组重金属离子含量空白对照组重金属离子含量 　　采用火焰原子吸收分光光度法测定Pb、Cd。 　　2.2.2 试验方法 　　称取新鲜土样10g,加入到90mL的无菌水中,在室温下振荡30min,制备成土悬液,吸取0.1mL土悬液涂布在Pb浓度为300mg#8226;kg?-1?、Cd浓度为200mg#8226;kg?-1?及Pb和Cd浓度分别为300mg#8226;kg?-1?和200mg#8226;kg?-1?的牛肉膏蛋白胨和PDA培养基上,30℃下培养,经过多次划线纯化后,转接到Pb浓度依次为500、700、900、1200、1500mg#8226;kg?-1?的培养基上,Cd浓度依次为300、500、600、700、900mg#8226;kg?-1?的培养基上,Pb和Cd混合浓度为500和300、700和300、700和500、900和500、900和700、1200和600、1200和900、1500和700、1500和900mg#8226;kg?-1?的培养基,多次划线纯化菌株,同时做镜检,直到获得纯的菌株。 　　取1mL菌悬液(待分析菌株)加入到49mL含重金属(Pb、Cd)的液体培养基中,液体培养基中Pb、Cd浓度分别为500mg#8226;L?-1?、5mg#8226;L?-1?及同时Pb和Cd浓度为500mg#8226;L?-1?和5mg#8226;L?-1?,在恒温摇床上培养(160r#8226;min?-1?,28℃),细菌培养3d,真菌培养7d,4500r#8226;min?-1?离心20min,上清液直接测定Pb、Cd含量,菌体经去离子水洗涤两次离心,再经70℃烘干磨细,称取0.01g干菌体于瓷坩埚中,加5mL浓HNO3消化至澄清,定容至10mL的容量瓶,测定其体内Pb、Cd的含量。通过液体培养基和菌体内Pb、Cd的含量来分析不同菌株对重金属的去除效果。 　　 　　3