RP-HPLC法测定黄连上清片中黄芩苷和盐酸小檗碱含量.docVIP

RP-HPLC法测定黄连上清片中黄芩苷和盐酸小檗碱含量 　　【摘要】目的:建立黄连上清片中黄芩苷和盐酸小檗碱的RP-HPLC含量测定方法。方法:采用RP-HPLC法,以ODS-C18为固定相,流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液(磷酸调pH3.0)采用梯度洗脱,检测波长270nm;流速1.0mL?min-1。结果:黄芩苷和盐酸小檗碱的线性范围分别为:0.2249～2.249μg、0.3662～3.662μg(0.9997 　　【关键词】RP-HPLC;黄连上清片;黄芩苷;盐酸小檗碱 　　【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)18-036-2 　　 　　黄连上清片是由黄连、黄芩、黄柏(酒炒)、石膏、栀子(姜制)、大黄(酒制)、连翘、菊花、荆芥穗、白芷、蔓菁子(炒)、川芎、防风、薄荷、旋覆花、桔梗、甘草等17味中药材组成。具有散风清热,泻火止痛之功效。用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙龈疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结、小便短赤等症。方中黄连、黄芩、黄柏、石膏清热泻火,燥湿解毒;栀子、大黄清热凉血解毒并可引热毒从二便而出,共为君药。该药原收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第六册,该标准中对部分药味采用了鉴别手段进行质量控制。为有效的控制产品质量,现采用RP-HPLC法同时测定黄连上清片黄芩苷和盐酸小檗碱的含量,可以节约分析成本,减少分析误差,提高药品质量标准。本法适用于黄连上清片的含量测定及质量控制。 　　1仪器与试药 　　Lc-2010A高效液相色谱仪(日本岛津),BP211D电子天平(北京塞多利斯)。对照品:黄芩苷(110715-200815)和盐酸小檗碱(110713-200911)均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇、乙腈为色谱纯;水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。黄连上清片:郑州豫密药业股份有限公司(批号20090203;黄连、黄柏、黄芩等药材均为市售品,并按相关药品标准鉴定,符合标准规定。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件及系统适用性试验 　　SHIMADZU VP-ODS C18(250×4.6mm,5μm);柱温为室温; 　　流动相A:乙腈。 　　流动相B:0.5%三乙胺水溶液(用磷酸调pH3.0)。 　　流速:1ml`min-1。 　　洗脱梯度时间程序: 　　时间(分钟) 流动相A(V/V %) 流动相B(V/V %) 　　检测器:紫外检测器,检测波长270nm。 　　进样量:10μL。 　　在此条件下样品各组分分离良好,对照品溶液、样品溶液及各阴性对照溶液的色谱图见图1。 　　A.对照品B.样品C黄芩阴性对照D.黄连和黄柏阴性对照 　　1.黄芩苷;2.盐酸小檗碱 　　2.2对照品溶液及供试品溶液的制备 　　对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷和盐酸小檗碱对照品各0.01181g、0.01465g,至50ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液,备用。精密量取5ml置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为黄芩苷、盐酸小檗碱对照品溶液。 　　供试品溶液的制备:精密称取黄连上清片细粉约0.4g置25mL量瓶,加甲醇适量,超声30min,放冷,用甲醇稀释至刻线,摇匀。取上清液,微孔滤膜过滤,取续滤液2mL置10mL量瓶用甲醇定容,摇匀作为供试品溶液。 　　2.3精密度试验 　　取同一混合对照品溶液,重复进样5次,每次进样10μL,记录色谱峰面积,计算黄芩苷、盐酸小檗碱的色谱峰面积,其RSD分别为1.0%,1.3%(n=5),结果表明精密度良好。 　　2.4重复性试验 　　取同一批号黄连上清片细粉(批,按2.1项下方法,精密称定5份,制备供试品溶液,平行测定,计算含量,黄芩苷、盐酸小檗碱的RSD分别为1.4%,0.9%,表明方法的重复性良好。 　　2.5稳定性试验 　　取同一样品溶液,分别在0,2,4,6,8,12小时进样10μL,记录色谱峰面积,计算黄芩苷、盐酸小檗碱的色谱峰面积,RSD分别为0.9%,1.2%,说明样品在12小时内稳定。 　　2.6线性试验 　　精密吸取黄芩苷、盐酸小檗碱对照品贮备液,分别配置成系列浓度的对照品溶液。注入液相色谱仪,照上述色谱条件测定黄芩苷、盐酸小檗碱的峰面积。按上述色谱条件进行峰面积测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,结果见表1。 　　表1 各指标成分的线性关系 　　指标成分 线性方程 r 线性范围 　　黄芩苷 Y=-4.393×104+2.025×104X 0.9997 0.2249～2.249μg 　　盐酸小檗碱 Y=2.0