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锌指核酸酶在基因组编辑中应用 　　 Shen Zhongfu摘要： 基因组编辑是建立在基因靶向修饰的基础上，对生物基因组进行改造的一项新技术。锌指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFN）是一种特异性强、应用范围广的人工合成酶，可在靶位点制造DNA双链切口（double-strand break，DSB）进而诱导细胞内源性修复机制，通过同源重组修复（homology-directed repair, HDR）或非同源末端连接（non-homologous end joining, NHEJ）途径实现基因替换和纠正，因而成为基因组编辑的良好工具。本文将就最近文献中提到的锌指核酸酶在基因组编辑中的应用做一综述。 　　Abstract: Genome editing is a new technology for biological genome transformation based on gene targeting modification. Zinc finger nucleases can induce a double-strand break (DSB) in a specific genomic target sequence, followed by the generation of desired modifications during subsequent DNA break repair, such as replacing or correcting a gene through homology-directed repair (HDR) or non-homologous end joining (NHEJ) pathway, which makes it the excellent tool in genome editing. Thus, I will make a review of application of zinc finger nuclease in genome editing in this article. 　　关键词： 锌指核酸酶；基因组编辑；同源重组 　　Key words: Zinc finger nucleases；Genome editing；Homologous recombination 　　 中图分类号：K826.15 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2012）11-0303-03 　　 　　0 引言 　　一个生物个体的基因组由编码序列即基因和非编码序列组成，包含决定该个体性状的全部遗传信息。在许多微生物、植物、动物包括人类的基因组都被破译之后，科学家们开始探索怎样在了解物种遗传信息之后对其实施操控[1]。通过在基因组水平上进行精确的基因编辑，人们可以更加准确、深入地了解疾病发病机理和探究基因功能，寻找到遗传性疾病治疗有效的手段，因此具有极其广泛的发展前景和应用价值。同源重组是实现基因编辑的技术手段，这一技术已经发展数十年，对该领域的研究产生了深远影响。然而，传统的同源重组技术效率极低，约为10-6，使得其在实际的应用中受到极大的限制。锌指核酸酶（zinc finger nuclease, ZFN）[2]技术的产生则为基因组编辑提供了更加有力的工具。ZFN技术是通过人工设计ZFN在基因组DNA的靶点???置切割产生双链切口（double-strand break，DSB），从而诱导细胞内源性的修复机制，在修复过程中实现对靶基因的修饰。ZFN技术的应用使基因组靶向修饰成功的效率达到1%-30%，同传统的同源重组技术相比有了极大提高[3]。因此该项技术在基因组编辑中的应用前景十分广阔，将为动植物基因组的改造、基因功能研究等等重大的基因组学问题提供便利。 　　1 ZFN及其特性 　　ZFN是一种能与靶位点特异性识别、结合并诱导产生DSB的内切酶，包含锌指蛋白DNA结合结构域和经内切酶Fok I演变而来的非特异性核酸酶结构域[2]。锌指是在DNA结合蛋白中常见的特殊结构，其基本单位是由一条肽链形成的ββα折叠[4]，由β链转角处的两个半胱氨酸和α螺旋C端的两个组氨酸与单一的锌离子结合从而将β链和α螺旋联系起来，形成指状结构，α螺旋上-1、3、6位置上的氨基酸残基可以特异性地与DNA分子中的3个碱基结合[5]。Fok I酶是一种非特异性的核酸内切酶，由结合结构域和切割结构域组成。人工合成ZFN就是将设计好的能识别靶序列的锌指蛋白和Fok I的切割结构域融合[6-7]。Fok I酶的切割结构域在形成二聚体时才能切割DNA产生DSB[8]，因而具有切割效应的ZFN都是成对结合在靶位点附近的序列上。每个锌指蛋白通常具有3