人牙周韧带细胞在SGBGPHBV三维支架材料上分泌功能研究.docVIP

人牙周韧带细胞在SGBGPHBV三维支架材料上分泌功能研究 　　【摘要】 目的 研究人牙周韧带细胞(periodontal ligament cells PDLCs)在溶胶-凝胶生物活性玻璃(sol-gel bioglass,SGBG)/聚羟基烷酸酯(poly-3-hydroxy butyrate-co-3-hydroxy valerate,PHBV)三维支架上的分泌功能,为牙周组织工程支架的选择提供依据。方法 通过体外细胞培养实验,人牙周韧带细胞与SGBG/PHBV体外三维培养的直接接触法,测定上清液羟脯氨酸含量,检测材料对细胞分泌功能的影响。结果 实验组上清液羟脯氨酸含量测定值与对照组有显著性差异,材料不影响细胞的分泌功能,同时支架材料的三维结构更能促进细胞的分泌功能。结论 SGBG/PHBV作为支架材料,有良好的生物相容性,有望应用于牙周组织缺损的组织工程修复。 　　【关键词】 　　溶胶-凝胶生物活性玻璃/聚羟基烷酸酯;人牙周韧带细胞;牙周组织工程 　　 　　The study of the secretory function of Human PDLCs on the scaffold material 　　CHEN Jian-Hong,HUANG Nan-Nan,TANGQian,et al.Department of Stomatology,the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangzhou,Guangdong 510630,China 　　【Abstract】 Objective The biocompatibilitybetween SGBG/PHBVandPDLCswereinvestigated toprovidea basis for the choice of the scaffold materialof periodontal tissue engineering.Methods Human PDLCs cultured in vitro were collected and seeded on the three-dimensional scaffolds of SGBG/PHBV,And the effection of the SGBG/PHBV on cell secretory function was observedby spectrophotometry which assayed the biochemical indexs-Hyp in supernate.Results The significant difference ofHYP in supernate between the experiment group and the control group(P[1]取因正畸拨除的第一或第二前磨牙,用组织块培养法进行原代培养。培养液为含10%FBS的DMEM完全培养基,于37℃,5%CO?2,饱和湿度条件下培养。最早第7天,可见组织块边缘游出细胞。待细胞长满瓶底约80%时进行首次传代,4~8代细胞用于实验 。 　　1.2.2 细胞来源鉴定 利用免疫组化ABC法进行波形丝蛋白单克隆抗体和细胞角蛋白单克隆抗体染色。 　　1.2.3 直接接触法观察材料形态和功能 　　1.2.3.1 支架材料准备 SGBG/PHBV块状多孔支架材料,将块状多孔SGBG/PHBV制成5 mm×5 mm×3 mm的方形小块,过氧化氢等离子低温灭菌系统消毒,置24孔板内用不含FBS的DMEM预湿过夜后接种细胞。 　　1.2.3.2 PDLCs与SGBG/PHBV复合培养 用0.25%胰蛋白酶消化状态良好的细胞,1000 rpm×5 min离心,将细胞浓度调整至1×10?6/ml,接种于材料上,每块接种200 μl,置37℃培养箱中,4 h后补加培养液1~2 ml,以后隔天换液。 　　1.2.3.3 细胞功能的检测 制备细胞悬液,对照组共设27孔,细胞计数后直接接种于两块24孔板,5×10?4个细胞/孔。实验组三维培养接种方法和密度同前,取27块材料分别培养于两块24孔板的27个孔内。分别在三维培养后12 h,24 h,48 h,各孔吸出细胞上清液1 ml,无菌封存,4℃保存。将共组共54份细胞上清液,按羟脯氨酸试剂盒说明书操作,用分光光度计在550 nm,空白管调零,测各管吸光度。 　　上清液中羟脯氨酸含量(μg/ml)=测定管吸光度/标准管吸光度×标准管浓度(2 μg/ml)。 　　换算成相同细胞数的羟脯氨酸含量运用SPAA12.11软件进行统计学分析。 　　2 结果 　　2.1 细胞培养