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消化道肿瘤多药耐药基因表达与临床相关性研究
消化道肿瘤多药耐药基因表达与临床相关性研究
摘 要 目的:为了研究消化道肿瘤多药耐药基因及其产物表达对化疗效果的影响。方法:应用免疫组化SP法检测106份消化道肿瘤组织中pgp、GST-π和TopoⅡ表达并分析其与消化道肿瘤临床病理特征的关系。结果:消化道肿瘤组织中pgp、GST-π和TopoⅡ阳性率分别为63.1%、62.5%和52%,与性别、肿瘤大小、部位、临床分期及浸润深度无明显关系(?P?<0.05);高、中分化腺癌pgp阳性率明显高于低分化腺癌(?P?<0.05);GST-π和TopoⅡ表达与肿瘤淋巴结转移有关(?P?<0.05);印戒细胞癌TopoⅡ阳性率明显低于其他组织学类型(?P?<0.05)。结论:pgp、GST-π及TopoⅡ在消化道肿瘤MDR发生中起重要作用,同时检测BCL-2基因在消化道肿瘤中的表达及其与MDR的消长变化,四者联合检测对化疗方案的制定及药物的选择意义重大,为开展个体化治疗提供依据。
关键词 消化道肿瘤 多药耐药基因产物 检测 个体化治疗
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.01.261
目前化疗是恶性肿瘤治疗中除手术、放疗以外最重要的手段,然而许多肿瘤常规化疗效果差,甚至失败。近年来研究表明肿瘤多药耐药(MDR)已成为肿瘤成功化疗的重要障碍之一。因此,克服MDR就成为肿瘤成功化疗的当务之急。选取消化道肿瘤患者106例,探讨MDR基因产物pgp、GST-π、TopoⅡ在消化道肿瘤MDR发生中的作用,为消化道肿瘤化疗药物的选择提供依据。
资料与方法
2006年3月~2010年12月收治消化道肿瘤患者106例,经病理学检查证实。病理类型:胃腺癌47例,胃印戒细胞癌11例,直结肠腺癌33例,食管腺癌?15例?。
组织标本的采集及贮存:全部标本均在手术切取肿瘤时收取,取材时避免取到肿瘤中心的坏死组织,106例消化道恶性肿瘤患者手术切除标本,经10%的福尔马林固定液固定,经脱水、包埋、切片进行免疫组织化学染色,试剂选自福州迈新公司。所选试剂有多药耐药化学基因糖蛋白-PgP,拓扑异构酶Ⅱ-Topo-Ⅱ,谷胱甘肽S转移酶-GST-π,Bcl-2。
意义:①多药耐药化学基因糖蛋白-PgP,意义:阳性(++)以上,耐药药物有阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托霉素、长春花碱、长春新碱、Vp-16、紫杉醇、泰素帝。②拓扑异构酶Ⅱ-Topo-Ⅱ,意义:阴性/1级,耐药药物有阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、Vp-16、vm?26、玫瑰树碱。③谷胱甘肽S转移酶-GST-π,意义:阳性(++)以上,耐药药物有阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。④Bcl-2,意义:是细胞凋亡的一种抑制因子,参与细胞凋亡的调控,亦可用于各种恶性肿瘤细胞的凋亡研究。
研究方法:⑴组织切片标本的制备:①固定:10%的福尔马林固定液固定。采用福尔马林固定液固定组织可保留绝大多数抗原,对免疫组织化学染色影响不大。②取材:对手术切除标本常规取材,避免取到肿瘤中心的坏死组织。③为了充分保存组织的抗原性,标本离体后立即采用固定剂脱水、浸蜡、包埋、制备成石蜡切片。⑵免疫组织化学染色及显色。⑶判断分析染色结果:①耐药判断标准:pgp、GST-π的判断标准以(+)表示,阳性细胞表达数<10%阴性,10%~25%(+),25%~75%(++),>75%(+++)。Topo-Ⅱ的判断标准以级别表示,观察500个或1000个肿瘤细胞,阳性细胞数/500或1000×100%来计算。阳性细胞数<25%以下Ⅰ级,25%~50% Ⅱ级,50%~75% Ⅲ级,>75% Ⅳ级。②Bcl-2的判断标准:阳性部位:胞膜或胞浆。
结 果
消化道肿瘤组织中pgp、GST-π和TopoⅡ阳性率分别为63.1%、62.5%和52%,pgp与性别、肿瘤大小、部位、临床分期及浸润深度无明显关系(?P?<0.05);高、中分化腺癌pgp阳性率明显高于低分化腺癌(?P?<0.05);GST-π和TopoⅡ表达与淋巴结转移有关(?P?<0.05);印戒细胞癌TopoⅡ阳性率明显低于其他组织学类型(?P?<0.05)。pgp、GST-π及TopoⅡ在消化道肿瘤MDR发生中起重要作用,同时检测BCL-2基因在消化道肿瘤中的表达,及其与MDR的消长变化四者联合检测有助于消化道肿瘤化疗药物的选择及预后判断。
讨 论
消化道肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是消化道肿瘤术后化疗的主要障碍。临床上许多肿瘤在经历了最初有效的化疗之后,最终仍难免于复发,其主要原因是肿瘤细胞对化疗药物的耐药性 ??[1,2]?。与MDR1基因相关的常用化疗药物包括烷化剂类(如BCNU,ME-CCNU等),植物碱类(如长春新碱、长春花
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