质谱在多肽氨基酸序列分析中的应用.docVIP

------------------------------------------------------------------------------------------------ —————————————————————————————————————— 质谱在多肽氨基酸序列分析中的应用 !!! !!!!!!!! !!! 分析与测试 !! 促进作用。 １多肽氨基酸序列分析方法 !!多肽氨基酸序列的分析是蛋白质组学的一个研 究内容 ［１］ Ｗｉｌｋｉｎｓ等在１９９４年率先提出的，其定义是指一个有 机体的基因所表达的全部蛋白质。蛋白质组的研究是从整体水平上研究细胞或有机体内蛋白质的组成及其活动规律。其研究已涉及到的范围包括蛋白质组作图、蛋白质组分鉴定、蛋白质数据库构建、新蛋白质的寻找、蛋白质翻译后修饰的分析、细胞周期、发育、肿瘤发生、发展、环境影响、疾病诊断、新药研究等多个领域［１］。 !! 一维或二维聚丙烯酰胺凝胶电泳从生物样品中分离分析蛋白质。随着高分辨二维凝胶电泳（２－ＤＰＡＧＥ）的引入，它已成为当前从复杂的生物样品中分离分析蛋白质最强有力的方法。样品中含有的多至 １００００个蛋白质可在一次２－ＤＰＡＧＥ操作中分离。传 统上分离后凝胶上的蛋白质，用适当的方法显色后，可用免疫印记方法、氨基酸组分分析、Ｅｄｍａｎ降解反应的Ｎ端测序和Ｃ端测序对蛋白质进行鉴定。但是这些技术非常费时而且灵敏度也不高［２］。 !! ８０年代后期，基质辅助激光解吸飞行时间质谱 （ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）和电喷雾电离质谱（ＥＳＩ－ＭＳ）打 开了有机质谱分析研究生物大分子的新领域，并很 快发展成为能在所有层次上分析研究蛋白质和其它生物分子的生物质谱学。 !! ［收稿日期］２００５－０９－２１ ［作者简介］张晓楠（１９７２－），女，工程师，从事药物研发及分析。 !!!!!!!! 张晓楠 （华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北石家庄０５００１５） ［摘要］多肽氨基酸序列分析是蛋白质研究的重要内容；日臻完善的质谱技术在该项研究中起到了巨大的作用。［关键词］质谱；多肽；氨基酸［中图分类号］Ｏ６２１．???５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００３－５０９５（２００５）０６－００６９－０２ 随着人们对未知领域探索的逐渐深入，蛋白多别适合分析多肽和蛋白质的混合物。而ＥＳＩ是当今有机质谱中最软的电离技术，它已经成功地用于多种类型的质量分析器。另外，由于ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ分析样品溶液是连续不断导入ＥＳＩ源内，因此ＥＳＩ源能直接与分离技术ＨＰＬＣ和ＣＺＥ联用对样品进行联机分离与鉴定。 肽类物质的研究也越来越多地渗入到化工、医药、环保等行业中。近些年，随着质谱以及液质联用技术的完善，对多肽氨基酸序列的分析又起到了很大的 !!在ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ分析多肽混和物时，ＨＰＬＣ 。蛋白质组的概念是由澳大利亚科学家先将混合物进行分离，再经ＥＳＩ源电离后，第一级ＭＳ选择特定ｍ／ｚ的多肽离子通过并进入碰撞活化室，在碰撞活化室内肽离子与惰性气体碰撞发生碰撞诱导解离（ＣＩＤ）生成碎片离子，第二级ＭＳ对裂解生成的碎片离子进行分析。应用ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ测定多肽的氨基酸序列，是对Ｅｄｍａｎ降解反应测序的最好补充，因为它能测定修饰的氨基酸和封闭的末端。ＥＳＩ－ＭＳ／ ＭＳ???得的多肽序列信息结合多肽的质量数据，在分 析蛋白质翻译后的修饰时特别有用。 在生物化学和细胞生物学的领域内，通常应用 ２蛋白质分析的两种质谱方法 !!在蛋白质分析中有两种质谱方法：质谱蛋白全 ３］ 谱分析（ＭＳｃｈａｒｔ。ｉｎｇ）和质谱指纹分析（ＭＳｍａｐｐｉｎｇ）［ 质谱蛋白全谱分析指的是组分分析，它的对象是完整的组织、体液或其提取物，其目的在于识别出尽可能多的肽和蛋白混合物中的组分。质谱指纹分析指的是组成分析，它的对象是单个的、纯化后的肽或蛋白，其目的在于测定它的一级结构、蛋白修饰和鉴别遗传差异等。 !!质谱蛋白全谱分析通过测定肽和蛋白的分子 量、加上已知蛋白和ＤＮＡ序列的信息，来试探性地确认给定组织或体液中存在的肽和蛋白。通常，质谱蛋白全谱分析可分为四步：１）从生物组织提取多肽和蛋白并将提取液切分；２）测定提取液中各组分的分子量；３）从肽或蛋白的计算机库中搜索被测分子量是否符合特定肽或蛋白质量；４）再确认分析，如部分的Ｎ—或Ｃ—端的测序分析，氨