膜片钳技术在中药对心肌钙离子通道作用研究中的应用_论文.docxVIP

膜片钳技术在中药对心肌钙离子通道作用研究中的应用 【摘要】 　　膜片钳技术自发明以来，被广泛用于生物学、生理学、药理学等多种学科的基础研究和应用研究中，为解决生物学跨膜信号传导问题提供了革命性的检测手段。目前该技术已运用于中药对离子通道作用的研究中，尤其是心肌钙离子通道。本文综述了近年来中药对心肌钙通道的作用。 【关键词】 膜片钳技术；中药；钙离子通道 The Application of Patch Clamp in the Research of Traditional Chinese Medicine on Cardiac Muscle Calcium Channels Abstract：Patch clamp technique has been widely applied to the basic and application research of biology,physiology,pharmacology since it was it offers revolutionary test method for biological signal the technique has been used in the research of the impact of traditional Chinese medicine on ion channels,especially for cardiac muscle calcium paper made a brief review on the effect of traditional Chinese medicine on calcium channels. Key words:patch clamp;traditional Chinese medicine;calcium channels 膜片钳技术是以微弱电流信号测量为基础,利用玻璃微电极与细胞膜封接来测量多种通道电流,其测量值可达到皮安级(pA,10-12A),是一种典型的低噪声的测量技术。膜片钳技术的问世给细胞生物学的研究带来了一场革命。当前该技术已经成为细胞电生理学的重要研究方法。尤其是该技术近年来渗透到中医药研究的各个领域,对中医药研究水平的提高起到了很大的推动作用。 1 膜片钳技术的基本原理 膜片钳的基本原理是利用负反馈电子线路，将微电极尖端所吸附的一个至几个平方微米的细胞膜的电位固定在一定水平上，对通过通道的微小离子电流作动态或静态观察，从而研究其功能。膜片钳技术实现膜电流固定的关键步骤是在玻璃微电极尖端边缘与细胞膜之间形成高阻密封，其阻抗数值可达10～100GΩ。由于此阻值如此之高，故基本上可看成绝缘，其上之电流可看成零。此密封不仅电学上近乎绝缘，在机械上也是较牢固的。此时可通过膜片钳放大器，选用不同的记录模式（细胞吸附式cell-attached，全细胞模式whoel-cell等）对细胞进行电压和电流钳制，记录各种离子通道电流、细胞的静息膜电位及动作电位等。 2 心肌细胞钙离子通道 1958年Fart和Katz等率先发现了钙离子通道(L型钙通道),目前已证实心肌细胞上存在B型、L型和T型三种钙通道且后二者属电压依赖性通道(Voltage dependent channels ,VDCs)。B型钙通道即背景钙通道(background Ca2＋ channels)，是静息钙通道；L型(long-lasting)钙通道是细胞兴奋过程中钙离子内流的主要途径；T型（transient）钙通道的功能与维持细胞自律性和低膜电位(接近静息膜电位)时钙的跨膜运动有关。心肌细胞上的L型钙通道，其启闭对动作电位平台期的形成、细胞内钙离子增高以及心肌细胞的电生理特性等起重要作用。 3 部分中药对心肌钙离子通道的作用 目前膜片钳技术的应用主要在以下几个方面：①离子通道特性的研究；②离子通道活动调控的研究；③离子通道生理与病理情况下作用机制的研究；④单细胞形态与功能关系的研究；⑤药物作用机制的研究。对中药研究而言，现阶段主要使用膜片钳单通道或者全细胞技术，观察中药对离子通道特性的影响来解释药物作用的机理，这将有利于阐明中药在细胞水平的作用机制。我们通过中药提取物对心肌各种钙通道的影响研究，来探讨其防治心率失常、强心的作用机制，或者发现其引起心率失常的离子通道原因。 人参 现代研究发现人参根中含有多种人参皂甙。包括齐墩果酸型人参皂甙单体R0，人参二醇组皂甙Rc,Rd，人参皂甙Rg1，人参三醇组皂甙单体Rh等。 齐墩果酸型人参皂甙单体R0(200 μmol/ml)对心肌L、