用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦.docVIP

用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦 药　理 用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用 郑学钦　胡春1(福州 1 350004福建中医学院附属人民医院;广州510091广州大学轻工系) 摘要　目的:考察茶叶、野菊花、山楂、芦丁对超氧阴离子自由基的清除作用。方法:以黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-鲁米诺体系作为超氧阴离子的产生体系,以化学发光的降低作为检测活力的指标。结果:茶叶、野菊花、山楂、芦丁都表现出对超氧阴离子自由基的清除作用,其活力与黄酮含量有关。结论:黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的清除是有效的。 关键词　化学发光;超氧阴离子自由基;黄酮 Thescavengingeffectofrutinetc.onsuperoxideradicalswithchemiluminescentmethod (AffiliatedPeople’sHospital,FujianCollegeofTraditionalZhengXueqin(ZhengXQ),HuChun(HuC)ChineseMedicine,Fuzhou350004) ABSTRACT　OBJECTIVE:Todeterminethescavengingeffectoftea,ChrysanthemumindicumL.,hawthornandrutinonsuperoxideradicals.METHODS:Reductionofchemiluminescenceworkedasanindexofactivitywithxanthine-xanthineoxidase-luminolsystemassuperoxideradicalsgeneratingsystem.RESULTS:Tea,ChrysanthemumidicumL.,hawthornandrutinshowedscavengingeffectonsuperoxideradicals.Theactivitywasrelatedtoitsflavonoidcontent.CONCLUSION:Flavonoidwaseffectiveinscavengingsuperoxideradicals.KEYWORDS　chemiluminescence,superoxideradical,flavonoids 黄酮类化合物有防止食用油脂过氧化作用 已为中外研究者的大量研究所证实,然而黄酮类化合物是否能够清除动物体内的自由基,尚未得到人们的系统证实。我们利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子自由基(O2),用化学发光剂鲁米诺使体系产生化学发光的方法,考察芦丁、茶叶、野菊花、山楂提取物在体外对O2的清除作用。1　方法与试剂 1.1　原料与试剂 绿茶为当年茶,野菊花和山楂均为市售品。芦丁、黄嘌呤(xanthine,X)、黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)(提取自奶油)为国产,鲁米诺(luminol,L)为Sigma产品。所用试剂均为分析纯。1.2　试样的制备 1.2.1　茶叶中多酚类物质的提取 [1] 热水浸提※过滤减压浓缩氯仿萃取水相 以乙酸乙酯萃取3次浓缩乙酸乙酯相干燥茶叶多酚类物质粗品。1.2.2　野菊花提取物:野菊花干燥粉碎以10倍体积分数为95%的乙醇回流24h浓缩乙醇提取物。1.2.3　山楂水提取物:山楂清洗100℃热烫3min冷却加水匀浆加果胶酶静置过滤浓缩干燥山楂水提取物。1.3　总黄酮的含量测定[2]精密称取芦丁,配成每毫升含0.332mg芦丁的甲醇标准溶液,分取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml,分别加入50gL -1 NaNO20.3 ml,5min后加100gL-1Al(NO3)3ml,放30.置6min后加40gL-1NaOH4ml,最后以体积分数为30%的乙醇定容至10ml,摇匀,10 J,1997,Vol.31997年332卷第3期 :绿茶min以后以第一管作空白于510nm波长处测 定吸光度(A510),并绘制标准曲线。茶叶等样品用同样方法测定A510,由标准曲线计算出各样品中总黄酮的含量(以芦丁计)。1.4　超氧阴离子自由基抑制作用的检测[3]1.4.1　反应物溶液的配制:X以0.05molLpH7.8的磷酸钾缓冲液(PBS)配制成 -1-1 0.05mmolL溶液;L以0.05molLpH7.8的PBS配制成1×10-4molL-1的母液,以一定的比例混合成X-L应用液;XO用PBS稀释至0.1ugml-1;芦丁及3种样品提取物分别用PBS配制成适当浓度的溶液。 1.4.2　反应体系的配方:样品管中加X-L液900μl,样液100μl,加XO10μl,即启动化学发光反应。本底管中加X-L900μl,P