小叶丁香构造（细胞）培养合成橄榄苦甙.pdf

日q 舌 ．1上-—JL 刖 昌 在人类长期的发展历史中，利用生物合成方法生产所需的物质是人类研究与 利用自然资源的重要途径之一。近年来，随着生物科学领域的飞速发展，以及与 化学尤其是天然产物化学(植物化学)的交叉融合，也包括植物组织(细胞)培 养技术的进展，使得利用植物细胞培养技术生产有价值的次生代谢产物成为目前 生物工程领域中倍受关注的研究领域之一。植物组织(细胞)培养生产的各类初 级与次级代谢产物均为可再生资源，是取之不竭、用之不尽的，其生产不受地理 环境、气候变化等自然条件的影响，值得研究与开发。 自20世纪30年代以来，全世界已有近干种植物进行过组织(细胞)培养方 面的研究，培养得到的次生代谢产物约为400～500种，包括生物碱、固醇、维 生素、激素、多糖、色素、香精、植物杀虫剂等多种类别的化合物。但迄今为止， 已经实现工业化生产的却为数极少，这主要是由于许多生物学和培养技术方面所 存在的问题，制约了植物细胞大规模培养技术的发展。因此，探索新的培养方法 和改进培养技术，增加次生代谢物质的产量，提高生产效率和经济效益，对于次 生代谢物质的工业化生产至关重要。 小叶丁香(Syringapubescens 植物，分布于我国的河南、河北、陕西、山西、甘肃等中西部地区，生长在海拔 800～2400米山地、沟内或崖石上。民间用其花、实泡茶饮用，有消炎、镇咳、 治疗肝炎和肝硬化之疗效。至今未被收录于药典，但很有研究价值。 橄榄苦甙属于裂环环烯醚萜甙类化合物，是从小叶丁香中分离得到的主要有 效成分，经药理与动物实验结果表明，具有抗菌、抗病毒、抗真菌、抗氧化、抗 癌、抗肝纤维化的显著作用，且毒性很低，是一个很有潜力的有效活性化合物， 从小叶丁香的植物化学研究中，进一步分离得到了裂环环烯醚萜甙类化合物、黄 酮类及芳醇等类型的化合物。并且利用RP—HPLC法测定了小叶丁香不同部位的 橄榄苦甙的含量。 前 言 由于野生资源的限制，很难满足工业化生产的需要，为了合理利用和保护自 然资源，以实现可持续发展的战略目标，本论文以小叶丁香为外植体，诱导产生 愈伤组织，筛选细胞系，进行固体培养和悬浮培养，研究其生长规律，并通过优 化培养基和培养条件，以及采用诱导因子调控次生代谢产物以提高橄榄苦甙的产 量，发现并利用从小叶丁香根部得到的伴生真菌培养进行了初步的探索与研究， 为进一步用于大规模生产橄榄苦甙提供理论与实践参考依据。 摘 要 摘 要 小叶丁香(Syringapubescens 野生植物，研究发现，其中的主要活性成分为属于裂环环烯醚萜甙类化合物的橄 榄苦甙。经药理与动物实验结果表明，橄榄苦甙具有抗菌、抗病毒、抗真菌、抗 氧化、抗癌、抗肝纤维化的显著作用，且毒性很低，是一个很有潜力的活性化合 物。 本论文通过硅胶柱层析并结合薄层层析，从小叶丁香的原植物中分离得到了 ester和芳醇类的2-(3，4一二羟基 (10一hydroxyoleuropein)、oleoside-1l—methyl 层析并结合薄层层析和制备高压液相，从培养得到的愈伤组织中分离鉴定出目标 次生代谢产物橄榄苦甙。建立了测定橄榄苦甙含量的RP—HPLC法，并且利用这 种方法测定了小叶丁香的不同部位——花、叶、茎和根之中的橄榄苦甙的含量； 测定了不同条件下培养所得的培养物中橄榄苦甙的含量：测定了伴生菌培养物中 橄榄苦甙的含量。其中在75％C2H50H回流提取条件下，小叶丁香花中橄榄苦甙 的含量为14．88 mg／g：根部为7．21mg／g,叶中为6．09mg／g；茎为4．19 mg／g，实 验结果证实花是小叶丁香中橄榄苦甙含量最高的部位。 本论文经过300多次实验，2000多个试样的诱导、培养、观察和数据测定， 开展的工作和取得的