核（苷）酸的荧光加强效应及其分析应用.pdfVIP

在壹；奎盖 出壅鑫堂亟土主焦适塞 煎嚣 摘 要 核(菅)酸是生命现象的物质基础。它对生物的生长、遗传、变异等现象都起 着重要的决定作用。它与遗传、肿瘤的发生、病毒的感染、射线对机体的作用都有 重要关系。而探针技术是研究核(苷)酸结构、功能、定性、定量的重要手段。剥+ 核(苷)酸探针的研究己成为生命科学领域的前沿课题。本论文从探索新的核(苷) 酸荧光探针、研究其相互作用机理和发光机理出发，以荧光为主要研究手段进行了 研究。 论文的第一部分综述了核(苷)酸荧光探针和稀土共发光效应的研究进展及其 分析应用，共引用了216篇文献。 在论文的第二部分中，首次研究了鸟苷酸(GMP)体系中稀土共发光效应。研 3+ 的增强效应最大。同时，实验了Tb．Gd．GMP体系荧光产生的最佳条件，即Tb”浓 在此条件下，建立了GMP的浓度与体系的荧光强度之间的线性方程，并将该效应应 对合成样品进行了检测，得到较好的结果。与Tb．GMP法相比，该法的检出限比其 低一个数量级，并具有较宽的线性范围。同时，本文对络合物的形成及其发光机理 进行了研究。认为，Tb-GMP和Gd—GMP络合物通过氧桥形成一网状结构，它们之间 的能量传递是通过络合物之间的氧桥来实现的。 在论文的第三部分中，首次在ATP体系中发现了稀土共发光效应。实验结果表 其中Gd3+的增强效应最大。本文实验了共发光产生的最佳条件，并且将其应用于ATP 的测定中。体系的最佳条件如下：Tb”浓度为2．OxlO—mol／1，Gd“浓度为 该法已用于ATP辅酶药片中ATP含量的测定，取得了满意的结果。实验指出，该方 法具有较宽的线性范围和较好的灵敏度。此外，本文还对该效应产生的机理进行了 较为深入的研究，探讨了络合物的形成。认为在Tb—Gd—ATP—phen体系中，分别形成 内和分子间能量转移将两络合物吸收的能量转移到Tbl+上，使得体系的荧光强度明 堡垒堑二——————些壅塑鏊鲨鳖垦———————≤墼 显增强。同时提出了在络合物中ATP和phen间存在堆积效应，ATP吸收的能量通过 堆积效应转移给phen，然后再转移到Tb“上的可能的能量转移通道。 在论文的第四部分中，主要研究了十六烷基溴化吡啶(CPB)与Tb．Gd．DNA体 系的相互作用。结果表明，CPB的加入能够使已有体系的共发光现象得到明显的增 强，且该体系的荧光强度与核酸的浓度在一定范围内成线性关系。将该体系用于 实验结果令人满意。我们对该效应产生的机理进行了较为深入的研究，认为CPB和 核酸通过静电引力和氨键作用力使核酸在CPB上发生聚集而生成了阳离子表面活性 剂一核酸离子络合物。而Gd”和Tb”能够分别与核酸上的磷酸根键合，分别形成Tb- 核酸-CPB和Gd-核酸-CPB络合物。吸收能量后，通过分子间能量转移将能量传递到 Tb3+上，从而增强铽离子的特征荧光。另外，体系中钆络合物的浓度远大于铽络合物 的浓度，因而每一个铽络合物周围均被许多钆络合物包围，形成了一个“能量绝缘 壳”，减少了能量损失，提高了荧光量子产率。 本论文的主要特点： 1．首次发现并研究了核营酸体系中的稀土共发光效应并将其应用于核苷酸的测 定中。这对于核菅酸的研究是一个重要进展。本方法为稀土共发光效应的应用开辟 了一个新的领域，同时也为核苷酸的检测提供了一个新的荧光探针，该效应使GMP 和ATP的检出限降低卜2个数量级。与核苷酸的其它荧光光度法相比，本方法具有 操作简便、快速、线性范围宽、灵敏度高等优点。 2．提出了核苷酸体系中稀土共发光效应的作用机理。在Tb—Gd-GMP体系中，认 为它们之间可能通过氧桥连接成网状络合物，同时通过氧桥实现了能量在络合物之 同时配体ATP与phen之间还存在着芳环堆积效应。这种堆积效应不仅增强了络合物 的稳定性，同时也使得ATP上的能量能够phen转移给Tb”。 3．实验发现，通过表面活性剂引入，使得核酸体系的共发光现象得到明显的增 强。实验结果表明，CPB和核酸通过静电引力和氢键作用力使核酸在CPB上发生聚 集而生成了阳离予表面活性剂一核酸离子络合物，而Gd”和Tb3+分别与核酸上的磷酸 根结合，