烟草多酚氧化酶的分离纯化，光谱性质，反应机理和运用研究.pdfVIP

摘 要 多酚氧化酶是从真菌到哺乳动物广泛存在的一类铜蛋白，它们的共同特征 是能通过分子氧氧化多酚到醌。烟草中的多酚氧化酶在烟草的烘烤过程中起相 当大的作用，它可使多酚类物质氧化并生成与烟叶颜色和香味有关的物质。烟 草多酚氧化酶同时在植物的抗病虫害方面有重要的作用。所以烟草多酚氧化酶 对烟草行业来说是非常重要的一类蛋白酶。由于烟草中色素的干扰，烟草多酚 氧化酶系统的分离纯化至今没有报道过。我们首次从烟草中系统地分离纯化了 II。 烟草中的多酚氧化酶，得到它们两种纯的同工酶，分别被命名为PPOI和PPO 本文对他们 质，催化反应机理和潜在应用等方 面进行了系 第一章 结构特征，催化反应机理等方面进 行了较为系统的综述。 A一50．CM— 第二章通过丙酮干粉，硫酸铵分级沉淀，DEAE—Sephadex G-75柱分离，首次从烟草中分离纯化出PPOI和PPO SephadexC一50，Sephadex I和PPO II，通过SDS．PAGE，PAGE电泳，实验证明PPOII已经达到很高的纯 度。 I和PPO 第三章本章主要讨论了PPO II的酶学性质以及光谱学性质。通 过实验发现，PPOI是具有与蘑菇PPO相似的活性中心，而PPO II的活性中心 结构是未报道过的一种新结构。 第四章本章提出了烟草PPO II～种新的催化氧化机理。主要有三点：一 是hydrogen superoxide与二铜反应形成hydrogen superoxidep-1，1化合物；二是 同位素的取代氢相连键的断裂过程是氧分子催化还原速度的决定步骤；三是0． II具有抗菌的主要原因也可 quinone和从semi—quinone到quinone的过程。PPO 能是由于PPO II能催化还原分子氧到超氧的过程，而超氧负离子具有抗菌的作 用。 第五章本章研究归纳为三点：Azide能够作为PPO II的激活剂；Azide与 PPO II结合后由于Azide的推电子作用，可能使PPOII的活性中心从CuO，Cu 形成Cu022-Cu的中心结构：Azide对PPOII的激活作用可能是Azide诱导产生 了Cu022-Cu，其中02”是真正的激活剂。 第六章实验表明SDS在底物溶液中时，增加了氧反应液中的氧的的浓度， 导致PPO的活性增强：当PPO和SDS形成复合物后，其构象的改变是造成活 性增强的主要原因。 II在不同条件下的二级结构， 第七章通过FT—IR和CD的方法研究了PPO 发现PPO II的二级结构在低pH的条件下有一定的稳定性，而在高的pH条件 下，PPO II的二级结构有很大的变化，d．helix几乎完全消失。但是在pH低和 高的条件下，PPO II的活性中心都发生了变化。在低的pH条件下，活性中心 的酚羟基桥联变为两分子的水分别与两个铜相配位。而在高的pH条件下，活 性中心的酚羟基桥联被打破，而一分子的羟基取代酚羟基与断