用NMR方法选择性检测蛋白质的支链NH2旌旗灯号.pdfVIP

摘 要 蛋白质的三维结构是理解其功能的基础 并为药物筛选 新药设计提供有用的 模型和信息 X-ray 晶体衍射(XRD)和NMR 是两种能够测定蛋白质三维结构的基本 技术 XRD 可以快速 有效地测定蛋白质的高分辨的三维结构 在PDB(Protein Data Bank) 中收录的蛋白质的结构中 约85%是由XRD 测定的 但该技术的缺点是需要 单晶样品 对于具有稳定溶液结构的蛋白质 只有NMR 波谱技术才能测定其三维结 构 而且该技术可以提供分子动力学 分子间相互作用的信息 虽然在NMR 波谱技 术中 NMR 谱的处理 分析 结构精制是个非常费时的过程 但该技术不需要单晶 样品 而且是在近似蛋白质生理环境下测定其结构 在本论文中 发展了一个选择性检测蛋白质的支链NH2 信号的脉冲实验 并用 该实验获得了蛋白质PDZ7 的支链NH2 信号的识别 此外 在本论文中对新的NMR 实验方法 以及NMR 在蛋白质结构测定中的应用做了较为全面的论述 具体的内容 如下 1 论文的第一章对蛋白质结构测定中的基本NMR 原理 新的NMR 实验方法做了 较详细的论述 尤其是在同位素标记技术 提高NMR 灵敏度 三共振实验等方 面做了较为详细的探讨 2 论文的第二章对NMR 在蛋白质结构测定中的蛋白质样品制备 NMR 实验 蛋白 质的NMR 谱的分析归属 蛋白质结构计算等做了论述 3 在论文的第三章中 对梯度灵敏度增强HSQC 实验进行了改进 在其t1 演化期加 入一段延时( 1/2JNH) 在该段延时中 标量耦合(JNH)的进动使得NH 信号变得 不可观测 而NH2 信号被保留 并用这一改进的HSQC 实验选择性检测PDZ7 的 支链NH2 信号 测定了PDZ7 的5 对支链NH2 信号 此外 用三共振实验方法完 成了蛋白质PDZ7 的主链的顺序认证 关键词 NMR 蛋白质溶液结构测定 三共振实验 选择性检测 PDZ7 I ABSTRACT Three-dimensional (3D) structure of a protein is help ful in understand ing its function, and is the base for drugs screening and designing. X-ray diffraction (XRD) and nuclear magnetic resonance (NMR ) spectroscopy are the two techniques for determining the protein structure. XRD is a most efficient and fast way to obtain high-resolution protein structure. About 85% of the structures in the protein data bank (PDB) were determined using XRD approach. The disadvantage of XRD is the requirement of single crystals. NMR is the only method available for the determination of the 3D protein structure in solution. In addition, NMR can provide information about the protein dynamics and interaction. Although NMR measurement s, data processing and structure refinements take longer time than XRD, it dose not need single-crystal and works in the solution that is close to the native