晶体氨基酸与水解鱼蛋白对半滑舌鳎(cynoglossus semilaeviss günther)稚鱼的生长、消化酶活力及pept1基因表达的影响-effects of crystalline amino acids and hydrolyzed fish protein on growth, digestive enzyme activity and pep t1 gene expression of juvenile cynogloss.docxVIP

晶体氨基酸与水解鱼蛋白对半滑舌鳎 (Cynoglossus semilaeviss Günther ) 稚鱼的生长、消化酶活力及 PepT1 基因表达的影响摘要本文以我国重要海水养殖鱼类半滑舌鳎(Cynoglossus semilaeviss Günther )为 养殖对象，在室内循环水中进行试验，每组试验鱼放养 150 尾，每种微颗粒饲料 随机投喂三组试验鱼。主要研究晶体氨基酸及不同分子量鱼肉水解蛋白替代鱼粉 蛋白对半滑舌鳎稚鱼的生长、存活、消化酶、代谢酶活力及相关基因表达的影响。 主要研究内容及结果如下：1. 饲料中晶体氨基酸替代鱼粉蛋白对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶和代谢酶活力 的影响以晶体氨基酸混合物分别替代 0%、25%、50%、75%和 100%鱼粉蛋白（0%、 25%CAA、50%CAA、75%CAA 和 100%CAA，在 25%替代水平设计棕榈酸甘油 酯包被晶体氨基酸混合物组（C-25%CAA）），配制试验微颗粒饲料。研究结果表 明，在不包膜条件下，随着氨基酸替代水平的升高，稚鱼的特定生长率（SGR） 显著下降；在 25%替代水平，包膜处理组（C-25%CAA 处理组）显著高于未包 膜处理组（25%CAA），且两者均与全鱼粉组（0%处理组）无显著差异（P0.05）。稚鱼的存活率随氨基酸替代水平的升高显著下降，包膜处理组（C-25%CAA 处 理组）与全鱼粉组(0%处理组）无显著差异（P0.05），但显著高于其余各组（P0.05）。鱼体粗蛋白含量随氨基酸替代水平的升高显著下降。全鱼粉组（0% 处理组）鱼体的粗蛋白含量显著高于晶体氨基酸替代组（P0.05）。25%处理组（25%CAA）与包膜处理组（C-25%CAA 处理组）无显著差异（P0.05），但显 著高于其余各组（P0.05）。在不包膜条件下，各处理组的胰蛋白酶活力随替代 水平的升高显著下降，且包膜处理组（C-25%CAA 处理组）与全鱼粉组（0%处 理组）无显著差异（P0.05）。各处理组淀粉酶活力随替代水平的升高显著上升。 肠刷状缘与肠亮氨酸氨肽酶（LA）和碱性磷酸酶（AP）活力与胰蛋白酶活力有 相似的变化趋势。谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活力随替代水平的 升高显著上升。本研究结果显示，饲料中晶体氨基酸显著影响了半滑舌鳎稚鱼的 生长、消化酶活力和代谢酶活力。晶体氨基酸替代 25%鱼粉蛋白相对于其他替代组对半滑舌鳎稚鱼的生长和各生理指标均有显著的提高作用。2. 饲料中不同分子量水解鱼蛋白与晶体氨基酸替代鱼粉蛋白对半滑舌鳎稚鱼生 长和消化酶活力的影响以低分子量水解鱼蛋白、未超滤水解鱼蛋白、高分子量水解鱼蛋白和晶体氨 基酸分别替代 30%的鱼粉蛋白，以全鱼粉组为对照组，配制人工微颗粒饲料，喂 养半滑舌鳎稚鱼。研究结果表明，半滑舌鳎稚鱼的存活率和特定生长率（SGR） 均以全鱼粉组最高，且显著高于其余组（P0.05）， 低分子量水解鱼蛋白组与晶体氨基酸组无显著差异（P0.05），但显著高于未超滤水解鱼蛋白组和高分子量 水解鱼蛋白组（P0.05）。鱼体粗蛋白含量在低分子量水解鱼蛋白组组最高，且 与全鱼粉处理组无显著差异（P0.05）。胰蛋白酶活力（胰段和肠段）均显示为 全鱼粉处理组最高，但与低分子量水解鱼蛋白组和未超滤水解鱼蛋白组无显著差 异（P0.05）。高分子量水解鱼蛋白组胰段淀粉酶活力最高，显著高于其他组（P0.05）。肠段淀粉酶活力在各处理组间无显著差异（P0.05）。肠刷状缘亮氨 酸氨肽酶（LA）活力和肠刷状缘碱性磷酸酶（AP）活力与胰蛋白酶有相似的变 化趋势。研究结果表明，当用不同的氨基酸源替代鱼粉蛋白时，低分子量小肽和 晶体氨基酸对半滑舌鳎稚鱼的生长起到了一定的促进作用，尤其低分子量小肽对 于促进半滑舌鳎稚鱼消化系统的发育起到重要作用，但具体替代水平还有待进一 步研究。3. 半滑舌鳎 PepT1cDNA 全长的克隆、序列分析及不同分子量水解鱼蛋白和晶 体氨基酸对 PepT1 基因表达的影响利用同源性克隆和 3’RACE、5’RACE 技术克隆了半滑舌鳎小肽转运载体（PepT1）的 cDNA 全长序列。克隆得到的半滑舌鳎 PepT1cDNA 全长 2684bp， 包括 5?端非编码区（UTR）98bp，开放阅读框（ORF）2190bp，3?端非编码区（UTR） 396bp，编码 729 个氨基酸。该蛋白有 12 处明显的跨膜区，并且在跨膜区 9 和10 之间有一个大的细胞外环，并且氨基和羧基都位于细胞内。经过与其他物种的同源性比较，发现这 12 个跨膜区域的氨基酸序列是高度保守的，但是 9 和 10 之间的细胞外环的氨基酸保守性较低。实时定量 PCR 技术检测了鱼粉蛋白、低 分子量、高分子量水解鱼蛋白和氨基酸对半滑舌鳎稚鱼内脏团