具有区段定向诱导分化活性的仿生组织工程韧带的分析-analysis of bionic tissue engineering ligaments with directional differentiation activity.docxVIP

具有区段定向诱导分化活性的仿生组织工程韧带的研究华中科技大小同济医学院附属协和医院骨外科 硕士研究生：李立群 导师姓名：王洪 副教授摘要目的：制备猪小肠粘膜下层（SIS），将其作为组织工程韧带的支架材料，应用同 基双功能交联剂 SS-PEG3400-SS 与重组人骨形态发生蛋白-2（BMP-2）进 行共价偶联，并随后与 SIS 进行共价交联反应，以研究经过共价偶联固化 了 BMP-2 的 SIS 在缓慢降解的同时，是否可以随着其降解而长时间自发 释放 BMP-2，从而持续刺激小鼠胚胎成骨细胞株（MC3T3-E1）向成骨细 胞定向分化。方法：将 BMP-2 与同基双功能交联剂 SS-PEG3400-SS 进行共价交联，然后将交联 后的产物与制备的 SIS 进行共价偶联，从而间接将 BMP-2 固化在 SIS 上。 用透射电镜对交联后的 SIS 进行形态学观察，并评估 MC3T3-E1 细胞在与 多种不同 SIS 上的增殖及定向分化情况。同时比较与 BMP-2 共价偶联后 的 SIS 与未与 BMP-2 共价偶联的 SIS 上钙结节的数量及碱性磷酸酶活力 值，结果采用 SPSS11.0 软件进行统计学分析。结果：与未修饰的 BMP-2 相比，共价修饰后的 BMP-2 仍具有生物活性。通过将 交联剂 SS-PEG3400-SS 与主要成分为胶原的 SIS 进行交联，可减慢 SIS 在 体外的降解速度，并且共价交联的 BMP-2 可随着 SIS 的降解而长时间释 放，从而能持续刺激 MC3T3-E1 细胞向成骨方向分化。结论：BMP-2 通过同基双功能交联剂 SS-PEG3400-SS 与 SIS 共价偶联。共价偶联 了 BMP-2 的 SIS 能更好刺激与其复合培养的 MC3T3-E1 细胞向成骨方向 定向分化。关键字：组织工程韧带 交联剂 骨形态发生蛋白-2 小肠粘膜下层 小鼠胚 胎成骨细胞The Reserach of The Bionic Tissue Engineering Ligament with Segmental Directional Induction and DifferentiationDepartment of Orthopedics, Union Hospital, Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology Candidate : Li LiqunTutor: Wang HongAbstractObjectives: To prepare porcine small intestine submucosa(SIS) for the scaffold of tissue engineering ligament，and using the homobifunctional cross-linking agentDisuccinimidyldisuccinatepolyethyleneglycol（SS-PEG3400-SS）for both the covalentcoupling of the bone morphogenetic proteins-2(BMP-2) to and cross-linking of SIS. And the goal is to evaluate whether the covalent bound BMP-2 will be releasedsimultaneously with the degradation of SIS，and which will lead to the MC3T3-E1cell directionally differentiate to osteoblast.Methods: Using the homobifunctional cross-linking agent SS-PEG3400-SS to covalently couple of BMP-2, and the conjugated BMP-2 molecules were then allowed to react with SIS for the immobilisation reaction , which leading to covalently immobilise the BMP-2 within SIS. Transmission electron microscope(TEM) were used to observe the morphous of the cross-linked SIS and evaluate the proliferation and diffe