第2章 糖与苷.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 七、糖的提取分离 ㈡分离 ㈢糖的提取分离实例 地黄根中单糖和低聚糖的分离 取鲜根→热EtOH、H2O提→阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性成分 活性炭柱（15%HOAc处理） 以H2O、稀EtOH（5、10、15、 25% 顺次洗脱）,经PC检定，合并 D-葡萄糖 D-半乳糖 D-果糖 蔗糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖(四糖) 毛蕊糖(五糖) 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 ㈠糖的鉴定 1．纸层析 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。 如：正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW 水饱和苯酚等溶剂系统。 显色剂：邻苯二甲酸苯胺、硝酸银试剂(使还原糖显棕黑色)、三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色）、3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色） 等。 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 2．薄层层析 可用（硼酸液 或 无机盐）+ 硅胶 → 制板 吸附剂：硅胶 （用0.03M硼酸液或无机盐的水液代水制板） 常用的无机盐：0.3M磷酸氢二钠或磷酸二氢钠 0.02M乙酸钠 0.02M硼酸盐缓冲液 0.1M亚硫酸氢钠/H2O 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 硼酸与无机盐制板的特点： 增加糖在固定相中的溶解度，使硅胶薄层吸附能力下降，利于斑点集中，又可增加样品的承载量。 显色剂：除纸层析应用的以外，还用如： H2SO4/H2O或乙醇液 茴香醛-硫酸试剂 苯胺-二苯胺磷酸试剂 等 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 3．气相层析 将糖制备成三甲基硅醚（增加其挥发性） 将醛糖用NaBH4还原成多元醇（避免形成端基异构体）制成乙酰化物或三氟乙酰化物。 4．液相色谱 填充材料——化学修饰的硅胶 优：不必制备成衍生物。 适合分析对热不稳定、不挥发的低聚糖和多糖。 分析单糖和低聚糖，其灵敏度不及气相层析。 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 5．离子交换层析 糖的硼酸络合物——可进行离子交换层析 优：不必制成衍生物，而直接用水溶液进行分离（与气相比较） 糖自动分析仪： 显 色：3,5-二羟基甲苯-浓硫酸 波 长：425nm 上样量：每种组成不超过1mg 洗脱剂：四硼酸钾的缓冲溶液 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 ㈡糖链结构的测定 主要解决的问题——单糖的组成、糖之间的连接位置和顺序、苷键构型 1．纯度测定 2. 分子量的测定 3. 单糖的组成 4. 单糖绝对构型的测定 5. 单糖之间连接位置的决定 6．糖链连接顺序的决定 7．苷键构型及氧环的确定 1.纯度测定 超离心法 高压电泳法 凝胶柱色谱法 旋光测定法 其他方法 2. 分子量的测定 质谱法 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 3．单糖的组成 低聚糖、多糖的结构分析，首先要了解由哪些单糖所组成，各种单糖之间的比例如何。 一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，经显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比。 也可用GC或HPLC对单糖定性定量。 GC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作标准。 4. 单糖绝对构型的测定 GC法 HPLC法 手性柱色谱法 手性检测器法 旋光比较法 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 5．单糖之间连接位置的决定 ①将糖链全甲基化→水解→甲基化单糖的定性和定量（气相层析） （甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置） ②13C-NMR测定：主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 6．糖链连接顺序的决定 ①缓和水解法：将糖链水解成较小的片段