栉江珧解剖配子的体外促熟分析-analysis of in vitro maturation promotion of anatomical gametes of ctenopharyngodon farreri.docx

栉江珧解剖配子的体外促熟研究摘要本论文以栉江珧这种双壳贝类为研究对象，通过氨海水、5-羟色胺等化学物质促熟栉江珧卵子或者刺激精子的激活，人工授精后进行早期胚胎发育观察，为双壳贝类体外促熟、遗传育种提供理论依据。1.pH与盐度对栉江珧精子激活及卵的体外促熟的影响（1）选取性腺成熟度高的雄贝作为材料。以1mol/L的盐酸和25%的分析纯氨水调节激活剂，筛选能激活精子的最佳pH，即精子的激活率和活力都最好。筛选出最佳pH后，在这个基础上用海水晶和蒸馏水调节消毒过滤海水的盐度，进一步研究精子在不同盐度梯度下的最佳激活率。结果显示：温度26℃、盐度25时，pH≤8.0时，栉江珧精子的激活率与活力均较低，pH在8.5－10.0之间激活率与活力均较高，其中pH为9.0时的活力最高，总运动时间约为60min。温度26℃、pH9.0时，精子在盐度15－40都能被激活，盐度在25－35范围内,精子激活率均很高,达100%,其中盐度为25.0时，激烈运动时间、总运动时间均最长,分别达到30min、57min；当激活液盐度超过35以后,精子激活率与活力均显著下降（P﹤0.05）。（2）选取性腺成熟度高的雌贝作为材料，将解剖的卵子浸泡在不同pH值、不同盐度（pH9.0）的消毒过滤海水中，取样观察并记录卵子生发泡破裂情况，将已促熟的卵子和激活的精子混合授精，检验受精率。结果表明：水温26℃、盐度25，卵子促熟的最适pH为8.5－9.0，pH≥9.5时，卵子的受精率开始下降，畸形胚胎的比例也开始上升；水温26℃、pH=9.0，盐度在20－35的范围内，栉江珧卵子的促熟效果较好，其中以盐度25的促熟效果最佳，促熟后的受精率达到70%左右。（3）水温26℃、盐度25时，用pH9.0、9.5的氨海水预先处理栉江珧卵子40－50min使大多数卵子的生发泡都消失，在不同pH、盐度的消毒过滤海水中授精，试验结果显示：pH7.0－9.0之间受精率随pH的增加而增加，pH﹥9.0时，受精率随着pH的增加反而开始下降；盐度10－25之间受精率随着盐度的增加而增加，盐度大于25时，受精率随着盐度的增加而下降。相比卵子未经预先处理而直接在不同pH、盐度的海水中授精所得的受精率，栉江珧预先处理组的卵子在低pH、盐度时受精率提高了8.0%－22.0%、20.0%－23.0%。2.氨海水浸泡对栉江珧卵子促熟的影响栉江珧精子在海水中几乎不能激活，氨海水0.10－0.30‰刺激，激活效果达到90%以上。氨海水促熟卵子的适宜浓度为0.10－0.20‰，受精率达到50%－60%左右，考虑0.20‰氨海水浓度组受精后产生的畸形胚胎的比例较高，因此，氨海水促熟的最适浓度为0.10－0.15‰,栉江珧最佳的授精时间为40－60min，在最佳时间内授精，0.05－0.15‰氨海水组受精率比20min时授精的受精率提高了5.66%－13.90%。3.5－HT对栉江珧解剖配子体外促熟5－HT是一种酸性化学物质，精子在5－HT处理液中激活率较低，大部分的精子只能在原地颤动。5－HT不能促进栉江珧卵子生发泡的破裂，与氨海水联合处理时表现出相互的抑制；预先用氨海水处理再用5－HT处理，5－HT对卵子促熟的效果仍不明显，试验的受精率比单独用氨海水处理低得多。4.氨海水对栉江珧早期胚胎发育的影响在第三章试验结果的基础上进行人工授精及胚胎发育的观察。结果表明：氨海水浓度为0.10－0.15‰受精率、孵化率较高且畸形的胚胎相对较低。在试验结果发现解剖法在小试验和生产中是一种快速育苗的方法，育苗成功的关键在于性腺成熟度要高，氨海水的浓度也要合适。本试验记录了栉江珧胚胎发育过程的时间并对胚胎发育的各个时期进行了显微拍照。关键词：栉江珧，配子，氨海水，激活，体外促熟ImprovingMaturationofGametesfromDissectedPatentA.pectinataAbstractInthispaper,theparentA.pectinataandC.ariakensisweredissectedforspermatozoaandeggscollection，andundertheimmersedofseawaterandammoniawateronspermatozoaoreggs,whichleadtothegametesmaturationoractivation.Weusedthepromotedmaturationeggsandthefreshspermstofertilizeforwatchingearlyembryonicdevelopment,sowecouldofferbasicdateforimprovingmaturationandgeneticbreeding.Effectsofsa