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实验一 半抗原免疫原的制备 实验目的: 1 了解半抗原免疫原的合成方法及基本原理； 2 将半抗原吲哚乙酸用混合酸酐法与载体蛋白牛血清白蛋白偶联。 试剂和仪器： 试剂：吲哚乙酸(IAA)，牛血清白蛋白(BSA)，三正丁胺，N-N’二甲基甲酰胺(DMF)，氯甲酸异丁酯，NaOH； 仪器：反应器，磁力搅拌器，微量加样器，滴管等。 实验步骤： １ 52.3mgIAA 2mlN-N’二甲基甲酰胺(DMF) 75μl三正丁胺 40μl氯甲酸异丁酯 磁力搅拌８分钟 形成IAA混合酸酐 ２ 210mgBSA 11ml蒸馏水 11mlDMF 420μl1mol/lNaOH 搅拌 实验步骤： ３ 将IAA混合酸酐逐滴加入到BSA溶液中 继续搅拌1h 200μl1mol/lNaOH 搅拌5h ４ 反应物装入透析袋 ４℃对10%DMF透析１d 对蒸馏水透析4d ５ 取出反应物 分装 -20 ℃保存 思考题： １ 小分子半抗原为什么要与载体蛋白先偶联才能作为免疫原？ ２ 载体蛋白的选择原则。 ３ 半抗原与载体偶联时，因其所带基团的不同需不同连接方法，试加以简述。 * 半抗原-载体连接方法3 氯甲酸异丁脂法 半抗原-COOH 载体蛋白-NH2 Cl-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-CO-NH-载体蛋白 实验原理： HO-CH2CH(CH3)2 ＋ 冷却 不断搅拌 低温 *
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