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间歇低氧训练活性氧介导基因调控作用研究 　　摘要：目的：试图从活性氧（ROS）角度出发，探讨间歇低氧训练对低氧敏感基因及相关基因表达调节作用的机制,为运动与低氧适应提供理论依据。方法：采用二氯荧光素双醋酸盐（DCFH?DA）荧光探针观察线粒体ROS的变化，利用RT?PCR技术研究心肌组织低氧诱导因子1(（HIF?1α）、原癌基因（c?fos）、MnSOD和肾脏组织EPO基因的mRNA表达水平的变化。结果：低氧应激后ROS产生增多，经过4周的间歇低氧训练适应后再低氧应激， ROS的产生减少；低氧应激后 HIF?1α、EPO、c?fos、MnSOD基因表达增加，间歇低氧训练适应后这些基因指标较常氧组呈显著性上升（p 　　关键词：间歇低氧训练；大鼠；活性氧；基因调控 　　中图分类号：G804.21文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)05-0615-03 　　 　　活性氧（ROS）作为细胞毒素的作用已被人们基本认可。除了其负面的损伤作用，ROS也积极参与对细胞信号转导的调控。大量研究证明，ROS参与许多重要的生命过程，如细胞增殖与分化、细胞凋亡、肿瘤的诱发与抑制、肌肉收缩、神经传导、细胞吸附、基因表达等均与ROS有着密切的关系。在间歇低氧训练中ROS的产生是否也充当第二信号分子介导基因表达呢？它又是如何介导基因调控的呢？这方面尚未见有文献报导，本文实验试图从ROS角度出发，探讨间歇低氧训练对低氧敏感基因及相关基因表达调节作用的机制,为运动与低氧适应提供理论依据。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1动物模型8周龄雄性SD大鼠70只，随机分为7组，分别为：1） 常氧安静组；2） 常氧训练组；3） 急性低氧安静组；4） 急性低氧运动组；5） 急性低氧训练组；6） 间歇低氧安静组和；7） 间歇低氧训练组，每组大鼠10只。6、7组每天20:00-次日8:00居住在常压低氧舱中（14.5%含氧量，采用的设备为美国Hypoxicon公司制造），共12 h，其余时间在舱外常氧中训练或自由活动，训练组（2）、（5）、（7）每天在舱外于动物跑台以25 m/min运动、1 h/d、5 d/周，共4周。（3-7）组采样前进行12 h低氧应激，（4）组低氧应激前进行1 h25 m/min运动。饲料由中山大学医学院动物实验中心提供，饮水为净化自来水，自由摄食、饮水，环境温度及光照时间正常。 　　1.2研究方法 　　1.2.1线粒体活性氧(ROS)的测定(DCFH-DA法)［4］ 　　1.2.2基因表达RT-PCR一步法。 　　1.2.2.1RT-PCR试剂美国Invitrogen公司SuperScript One-Step RT-PCR System with Platinum Taq DNA Polymerase。 　　 　　1.2.2.2引物下面引物设计采用OMIGA2.0软件,在gene bank 中可查到。 　　 　　1.2.2.3反应条件48℃ 25 min；94℃2 min；94℃ 15sec；55℃ 30sec；72℃ 1 min；32个循环；72℃延伸7 min。 　　1.2.2.4结果计算和统计处理凝胶电泳结束后用凝胶成像系统拍照并进行电泳条带光密度分析。标本靶基因条带光密度参数与内参基因（GAPDH）条带的光密度参数之比值作为该标本mRNA的表达水平参数，在WINDOWS FOR SPSS11.0软件上进行统计，采用独立样本?T?检验，以平均数±标准差(Means±SD)来表示。 　　 　　2结果 　　 　　2.1低氧应激对大鼠心肌线粒体ROS的影响 　　 　　由表1可知，急性低氧应激后，心肌ROS呈上升趋势。与常氧安静组相比，急性低氧安静组（组3）均显著升高（?p 　　综上所述，低氧应激ROS产生可使HIF-1α基因表达增加，使一些相关低氧敏感基因EPO、MnSOD、c-fos的转录发生变化，促使其转录及mRNA表达增强。HIF-1可能直接受ROS的调控。ROS作为低氧应激和运动应激的靶点之一引起细胞氧化应激，其产生又能激活核因子HIF-1，从而诱导EPO、MnSOD等抗氧化酶基因的表达，可见间歇低氧训练中ROS充当第二信号分子介导基因表达。这些基因指标的变化规律与ROS的变化相吻合，表明HIF-1α、EPO、c-fos、MnSOD基因的表达与低氧适应有密切关系。低氧环境条件下ROS产生增加，使机体产生氧化应激，由于ROS通过信号传导通路激活转录因子基因的转录,通过它再诱发应答靶基因的较高水平转录和表达,导致一系列抗氧化酶及DNA修复酶活性增强和其它蛋白质的变化,从而提高低氧的适应能力。 　　 　　参考文献： 　　［1］ Sethi S, Si