间歇运动对大鼠骨骼肌凋亡基因Bax、Bcl-2及相关因素影响.docVIP

间歇运动对大鼠骨骼肌凋亡基因Bax、Bcl-2及相关因素影响 　　摘要：通过比较间歇运动中不同类型骨骼肌中氧自由基，线粒体Ca2+含量代谢情况，Bax，Bcl－2凋亡基因表达的差异，来探讨间歇运动导致骨骼肌细胞凋亡的可能机制。24只SD大鼠，随机分为安静对照组（8只），一次间歇运动组（8只），长期间歇训练组（8只）。运动后24 h取比目鱼肌和胫骨前肌，采用RT－PCR方法检测Bax，Bcl－2基因表达情况，并测定组织中SOD活性、MDA含量和线粒体钙含量。结果表明：1） 一次间歇运动组胫骨前肌中Bax/Bcl－2比值显著升高（P＜0．05），且Bcl－2表达显著低于长期间歇训练组（P＜0．05）。2） 运动后，胫骨前肌和比目鱼肌中SOD活性均升高了，但仅一次间歇运动后胫骨前肌SOD活性较安静时增加具有显著性（增加48％，P＜0．05）。3） 一次间歇运动和长期间歇训练后胫骨前肌中MDA含量均非常显著性高于安静对照组（P＜0．01）。4） 一次间歇运动后，胫骨前肌线粒体Ca2+含量较安静时增加100％，差异非常显著（P＜0．01），同时也显著性高于比目鱼肌中线粒体Ca2+含量（P＜0．05）。结论：1） 一次高强度的间歇运动可能主要通过快肌中Bax表达增强，Bcl－2表达减弱，氧自由基的升高，粒体内钙超载，共同致运动能力下降。2） 长期间歇训练可能通过增强抗氧化能力，增强抗凋亡基因表达来增强运动能力。间歇训练后，快慢肌应对细胞内Ca2+升高的能力增强，这可能是间歇训练增强运动能力的另一细胞内信息转导机制。 　　关键词：间歇运动；Bax，Bcl－2；氧自由基；线粒体钙 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)07-0922-04 　　 　　细胞凋亡是细胞死亡的一种形式，研究细胞凋亡具有重要的生物学及生物医学价值。Bcl-2作为一种抑制细胞凋亡的基因，它的表达可以抑制细胞凋亡；Bax是Bcl-2家族的另外一种促进细胞凋亡的基因，它的过表达可以拮抗Bcl-2的保护效应而使细胞趋于凋亡。Bax/Bcl-2的比值决定了细胞是否凋亡的命运［1］。线粒体途径是介导细胞凋亡的一个重要途径。线粒体中可产生大量的氧自由基，攻击细胞膜造成脂质过氧化，引发细胞凋亡；也可以由于线粒体内钙超载或线粒体膜电位的改变引发细??凋亡。本研究以间歇运动为运动模型，通过检测骨骼肌中Bax和Bcl-2的表达情况，同时测定反映骨骼肌组织内氧化损伤的SOD活性和自由基水平的MDA含量，以及线粒体钙含量来反映组织内氧化损伤，线粒体钙超载与细胞凋亡基因表达的关系，期望揭示高强度间歇运动导致细胞凋亡的机制，为运动训练提供科学的理论依据。 　　 　　1研究对象与方法 　　 　　1．1研究对象与运动模型 　　1．1．1研究对象与分组三月龄清洁级雌性SD大鼠24只，购自中山大学医学院动物实验中心。体重(180．5±19．7)g。分笼饲养。将24只大鼠随机分为3组：安静对照组（n=8）；一次间歇运动组（n=8）；长期间歇运动训练组（n=8）。 　　1．1．2运动方式（改良于Bowles,D．K等［2］）安静对照组：平时不进行训练，笼内自由饮食，自由活动，最后同运动组一起处死并取材。 　　一次间歇运动组：训练前进行一周适应跑台训练，速度逐渐递增，但是到一周末时速度不能超过20 m/min。正式运动时采用16 m/min 和50 m/min各2 min。 5%grade的间歇运动，重复10次，45 min/d(包括5 min热身运动)，运动一次。 　　长期间歇训练组：在进行一周适应训练后，进行运动方式同一次间歇运动组的训练方式相同，每周训练5 d，周三和周日休息，正式训练共7周。 　　1．2动物取材与标本制备 　　1．2．1动物取材两运动组大鼠在末次运动后24 h，同安静组大鼠一起称重，麻醉后，取后肢两侧比目鱼肌和右侧胫骨前肌，于生理盐水中洗净后，用吸水纸吸干水分。将胫骨前肌分成两块，一块用于生化指标的检测，一块用于分子生物学实验；左侧比目鱼肌用于生化指标的检测，右侧比目鱼肌用于分子生物学实验。所有的骨骼肌组织在分装好后迅速置于液氮中冷冻保存。 　　1．3主要实验仪器与试剂 　　1）智能型热循环仪：PTC-200，美国；2）水平电泳仪（APOLLO），美国；3）全自动凝胶数码成像系统及分析系统（SynGene GeneGenius ），美国；4）RT-PCR试剂盒，购于宝生物工程（TaKaRa）（大连）有限公司。5）琼脂糖，西班牙。6）SOD活性检测试剂盒，MDA含量检测试剂盒，钙测定试剂盒，考马斯亮蓝蛋白定量检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 　　1．4指标检测 　　1．4．1Bax、Bcl-2基因表