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酶抑制剂筛选研究进展 　　中图分类号：R97 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2007)03-0117-03 　　20世纪60年代初，Umezawa提出了酶抑制的概念,从而将抗生素的研究扩大到酶抑制剂的新领域。酶抑制剂新药发现的途径：一是来源于天然化合物，包括动植物和各种微生物等，二是化学合成物。在目前上市的药物中，以受体为作用靶点的药物占52%，以酶为靶点的药物占22%，以离子通道为靶点的药物占6%，以核酸为靶点的药物占3%。因此，酶抑制剂的开发是新药来源的一个主要途径。以酶为靶点开发新药存在巨大潜力，今后很长一段时间仍然是发现新药的重要着手点。?? 　　 　　1 我国酶抑制剂筛选的进展? 　　我国对酶抑制剂的研究起步较晚，始于20世纪70年代末，但是我国进行有计划、有规模的筛选还不到10年，以前的工作没有成规模的化学合成作基础，筛选分散，随机性大。只有最近一些年来，随着高通量筛选和组合化学及组合生物合成技术的结合，规模化筛选药物得到了极大的发展，国内许多单位相继开展了酶抑制剂的筛选工作，福建省微生物研究所、上海医药工业研究院、中国医学科学院医药生物技术研究所、四川抗生素研究所等对酶抑制剂进行了大量研究。国内最为显著的是对血脂调节剂HMG-CoA还原酶抑制剂的研究。高通量筛选技术的发展，是我国筛选酶抑制新药的重大突破，1998年，中国医学科学院药物研究所引进了国内第一台微量闪烁计数器（microplate scintillation lurminescense counter）对96孔板进行快速的放射性活性测定，使放射免疫实验及放射配基实验自动化、微量化，实现了从整体动物模型向高通量筛选模型的转化，为酶抑制剂的大规模筛选奠定了基础。目前，国内利用高通量筛选每周可筛选数万个化合物。?? 　　 　　2 酶抑制剂源? 　　目前，酶抑制剂主要来源于植物、微生物和化学合成。微生物产生酶抑制剂是来源于微生物的初级代谢产物和次级代谢产物，研究最多的是放线菌，也是产生微生物药物最多的类群，其中最重要的是链霉菌属（streptomyces）；细菌、真菌也是酶抑制剂的重要药源微生物。除了传统的药源菌筛选分离外，研究人员的注意力更集中到了各种新的微生物类群中，如海洋微生物、极端微生物［1］。自然界植物种类丰富，但仅有不到10%被测定过某种生物活性，从植物中筛选酶抑制剂存在巨大的潜力，在未来相当长时间内仍是酶抑制剂新药的主要来源。植物源酶抑制剂筛选的难点就在于植物粗提物中“假阳性”结果太多，干扰真正有效成分的筛选，目前，国外对此采取了一系列措施，筛选前先通过纯化，采用提取物通过HPLC或固相萃取后结合质谱作出化合物指纹图谱库，与已有的经验数据库进行比较，有新成分的粗提物再进一步进行药理活性筛选, 再者，他们还可以先将粗提物通过HPLC来鉴别出是否存在吸收光谱有特征的化合物，这样可以减少筛选的盲目性［2］。新药筛选的化合物库中有70%左右为有机化学产物，因此，合成药是新药的主要来源，将高通量筛选技术与组合化学和组合生物合成技术的结合，实现了酶抑制剂大规模筛选，是世界许多大制药公司筛选酶抑制剂新药的主要渠道。?? 　　 　　3 筛选模型? 　　酶抑制剂的筛选模型分为三类：整体动物水平模型、组织器官水平模型和细胞分子水平模型。整体动物模型通常效率低、耗费多，筛选的样品量多而筛选出的化合物却很少，并不适合作为药物初筛的模型。而组织器官模型是药物筛选的一大进步，它在一定程度上克服了整体动物模型的不足，减少了筛选样品量，降低了劳动强度，扩大了筛选规模，减少了动物用量，提高了筛选效率，降低了筛选成本，但是尽管这样，还是存在规模小、效率低、样品量较大等缺点，不易实现一药多筛。随着酶和受体作为靶分子的阐明及分子生物学和细胞生物学技术的发展，分子药理学的不断深入，细胞分子水平药物筛选模型应运而生，此模型克服了前两者的缺点，实现了大样本量的筛选和一药多筛，已成为目前药物筛选的主要方法，使传统的手工筛选形式转变为由计算机控制的自动化大规模筛选的新技术体系，从而产生了高通量筛选［3,4］。高通量筛选始于20世纪80年代后期，在20世纪90年代后期得到极大发展，已成为酶抑制剂新药发现的主要手段，筛选快速、高效，其筛选的过程为： 粗筛→复筛→深入筛选→确证筛选。其先进的检测方法使每周筛选数万个化合物成为可能，对酶抑制剂的筛选大多数情况测定酶活性即可检测，其检测方法主要为：放射免疫检测（RIA）、荧光检测（FA）、闪烁接近检测（SPA）、比色法检测等。Flotow通过放射法已成功建立了P56kk激酶抑制剂的高通量筛选模型。Taft等［5］也利用此法建立了（1.3）β-葡萄糖合酶抑制剂的高通量筛选方法。基于放射性的闪烁接近检测（SPA）技术已