集落刺激因子对慢性脑缺血成年鼠胶质细胞可塑性及记忆改善影响.docVIP

集落刺激因子对慢性脑缺血成年鼠胶质细胞可塑性及记忆改善影响 　　【摘要】 目的 探讨rhG?CSF对慢性低血流灌注脑缺血成年鼠海马胶质细胞可塑性及记忆改善的影响。方法 3月龄雄性SD大鼠随机分为缺血组、对照组和干预组,每组15只。采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能,免疫组化及荧光染色后对海马CA1区胶质细胞数量及胞质突起长度进行图像分析。结果 缺血组海马CA1区GFAP阳性细胞明显少于对照组(P 　　【关键词】 慢性脑缺血;粒细胞集落刺激因子;胶质细胞可塑性;学习记忆;海马 　　 　　Treatment effects of GCSF on gliacyte plasticity and cognitive function in chronic cerebral hypoperfued adult rats 　　 　　SHU Xi?ji,LIU Wei,ZHOU Hong?yan,XIONG Wei?peng,et al. 　　Department of pathology and pathophysiology,medicine college,Jianghan University,Wuhan 430056,China 　　 　　 　　【Abstract】 Objective To explore effect of rhG?CSF on gliacyte plasticity and cognitive handicap in chronic cerebral hypoperfusion adult rats.Methods 45 male?SD?three?month rats were randomly divided into ischemic model group,control group and rhG?CSF?treated group,each group has 15 rats.Spatial learning and memory was accessed by Morris Water Maze,immunohistochemistry and image analysis were employed to detected the number and cytoplasmic process length of GFAP positive cell in hippocampal CA1 region.Results GFAP positive cells of ischemic model group was significant less than control group(P[1]。胶质细胞可塑性在神经信息传递、整合和调控等促进认知改善的过程中起关键作用[2]。重组人粒细胞集落刺激因子(rhG?CSF)对于造血细胞的生长和分化起重要介导作用,具有刺激骨髓干细胞迁移、增殖、分化、成熟等生物学功能。本研究构建慢性脑缺血模型,从胶质细胞可塑性改变及学习记忆功能改善的角度,探讨rhG?CSF对慢性脑缺血损伤的修复作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 建模与分组 　　3月龄雄性清洁级SD大鼠45只,体重(287±37)g,随机分为缺血组、对照组和干预组,每组15只。1%戊巴比妥钠35~40 mg/kg麻醉大鼠,分离并结扎双侧颈总动脉,作为缺血组。假缺血的对照组仅分离双侧颈总动脉但不结扎。大鼠术后再常规饲养6个月,期间有8只死亡,最后存活鼠缺血组11只、对照组14只、干预组12只。干预组rhG?CSF(齐鲁制药公司产品)的剂量为10 μg/kg;缺血组、对照组采用生理盐水作为安慰剂,均皮下注射,手术6个月后连续3 d,停药5 d,完成学习记忆功能评估后立即处死大鼠,取材制片。 　　1.2 学习记忆功能评估 通过定位航行实验评估大鼠空间学习能力,空间探索实验评估大鼠空间记忆能力。评估实验前1 d,让大鼠在无逃逸平台的水池中适应性游泳2 min。定位航行实验:连续5 d,每天上午同一操作者将大鼠面向池壁从不同象限入水,找到平台后站立15 s,记录其找到隐匿平台所耗的逃逸时间,再从平台上移开休息60 s后进行下一轮实验。若在120 s内大鼠未找到平台,由操作者引导上平台,逃逸时间记为120 s。空间探索实验:完成定位航行实验后撤去平台,将大鼠从平台所在的对面象限中放入水池,记录2 min内大鼠穿过平台所在区域的次数及停留于平台所在象限的时间。 　　1.3 海马胶质细胞可塑性的图像分析 4%多聚甲醛全身灌注固定,取含海马结构的组织制片。免疫组化染色采用即用型GFAP抗体及PV?9000试剂盒完成。设PBS为一抗阴性对照、已知阳性切